师伯省刘永新彭丽华付建明

四氢胡椒碱对辣椒碱软膏透皮渗透性的影响

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目的 评价四氢胡椒碱等透皮渗透剂对辣椒碱软膏体外透皮作用的影响。方法 分别制备含95%乙醇的辣椒碱软膏及以2%四氢胡椒碱乙醇溶液，2%二甲基亚砜乙醇液和2%二甲基亚砜乙醇液为透皮渗透剂的辣椒碱软膏。采用Franz扩散池，用离体小鼠皮肤为透皮屏障，以高效液相色谱法测定体外接受液中辣椒碱的含量，计算其累计透过量（Q），将数据进行释放动力学模型拟合。结果 样品辣椒碱软膏体外释药符合Higuchi方程，含95%乙醇的辣椒碱软膏有一定的促渗作用，含透皮渗透剂的辣椒碱软膏具有促渗作用，效果最佳的是四氢胡椒碱，其次是氮酮，最后为二甲基亚砜。结论 以2%四氢胡椒碱为透皮渗透剂的辣椒碱软膏的透皮促进效果更佳，可促进药物有效成分快速有效地渗透。

四氢胡椒碱；辣椒碱；氮酮；二甲基亚砜；促渗剂；经皮渗透

四氢胡椒碱是由生物碱胡椒碱（piperine）氢化而来。四氢胡椒碱除确定的抗惊厥、抗癫、镇痛以及抗蝇虫作用外，还可促进天然成分快速有效渗透，使皮肤组织对功效成分的吸收利用得到显著改善和促进，可协助药品、化妆品功效成分快速渗透皮肤。同时也是制药行业中多种药物必需的原料和中间体。是目前唯一从植物中提取出来具有强效促渗透作用的安全、高效、天然的促渗成分。辣椒碱是辣椒碱软膏的主要活性成分，是一种天然的植物碱，主要用于镇痛、止痒、活血等，其镇痛强度与吗啡等同，但较吗啡作用持久，且不成瘾。作为第一推荐的外用镇痛药物，其半衰期较短，且具有较强的首过效应，在大鼠体内，辣椒碱的半衰期为7.06 min，在治疗慢性疼痛临床上一般需要用药约一周以上才有明显的效果，因此辣椒碱不适合口服或注射给药，而较适合透皮给药。本文研究了四氢胡椒碱等不同渗透剂对辣椒碱软膏透皮渗透性的影响，观察了三种促渗剂对其体外透皮的促渗作用，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 药品与试剂 辣椒碱软膏（长春普华制药股份有限公司）、四氢胡椒碱（河南倍特生物科技有限公司）、氮酮（天津市巴斯夫化工有限公司）、二甲基亚砜（天津市富宇精细化工有限公司）、辣椒碱对照品（中国药品生物制品检定所），重蒸馏水，色谱纯甲醇，其他试剂为分析纯。

1.2 动物 190～230 g雄性大鼠（河南中医药大学实验动物中心提供）。

1.3 仪器 Lc-10AT vp plus高效液相色谱仪（日本岛津）；SPD-1OA vp plus检测器；RYJ-6B型药物透皮扩散实验仪（上海黄海药检仪器有限公司）；LG16-W离心机（北京医用离心机厂）

2 方法与结果

2.1 辣椒碱软膏的制备 样品A：取市售辣椒碱软膏1 g，加95%乙醇0.5 ml搅拌均匀即可，作空白对照；样品B：取市售辣椒碱软膏1 g，加2%四氢胡椒碱乙醇溶液0.5 ml，搅拌均匀；样品C：取市售辣椒碱软膏1 g，加2%氮酮乙醇溶液0.5 ml，搅拌均匀；样品D：取市售辣椒碱软膏1 g，加2%二甲基亚砜乙醇溶液0.5 ml，搅拌均匀。

2.2 离体鼠皮的制备 取事先准备好的试验鼠，用乙醚麻醉后固定四肢，用电动剃毛剪除腹部毛，剪下腹部皮肤，除去皮下脂肪层和血管及残留物，用0.9%氯化钠注射液洗净，检查其完整性，置于冰箱中保存，备用。

2.3 高效液相色谱法（HPLC）测定辣椒碱[1-2]

2.3.1 色谱条件 色谱柱为C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为甲醇:水:磷酸（65.0:35.0:0.1）；柱温30 ℃；流速为1.0 ml/min；检测波长为280 nm；进样量为10 μl。

2.3.2 制备标准曲线 对照品25 mg精密称取置于25 ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，放置，即为标准储备液。然后分别取标准储备液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 ml稀释至25 ml，进样，测定。以测得峰面积Y为纵坐标，辣椒碱的质量浓度X为横坐标，进行线性回归，得回归方程Y=7 826.2+219 370.9X，r=0.9995，表明辣椒碱在0.2～1.0 μg/ml与峰面积成良好的线性关系。

2.3.3 制备供试品溶液 于4 ml离心管中加入接收液，4 000 r/min（离心半径r=4 200 mm），离心10 min即得。

2.3.4 透皮渗透实验 从冰箱中取出鼠皮，恢复至室温，0.9%氯化钠注射液冲洗，用滤纸吸干表面液体，将其固定于Franz扩散池的两个半池之间，角质层面向供给池，真皮层面向接受池。分别准确称取以上4种样品0.4 g，均匀涂于鼠皮皮肤表面，扩散池有效面积为2.83 cm2，扩散池容积为7 ml。在接受池内置一磁力搅拌棒，接受池置磁力搅拌器上，在恒温（37.1 ±1.1）℃、恒速（3 000 r/min，离心半径r=4 200 mm）下不断搅拌。于涂药后0、15、30、60、120、180、240、300、360 min分别定时从接受池取样4 ml（接受液为0.9%氯化钠注射液），取样后立即补充同体积的接受液，于280 nm处测定取出接受液的峰面积（Y），将其代入标准曲线方程，计算辣椒碱质量浓度。

一定时间单位面积的累计透过量Q（μg/cm2）按下式计算：

式中Qs为第n次取样时的累积渗透量；V是接受液体积；Vi为第i次取样的体积；S是扩散面积；Ci为第i次取样测得的接受液中辣椒碱的质量浓度。

图1 3种不同促渗剂对辣椒碱软膏经皮渗透的影响

结果见图1，可见3种促渗剂对辣椒碱软膏都有一定的促进作用，作用效果最佳的是四氢胡椒碱，其次为氮酮，最后是二甲基亚砜。

3 讨论

渗透剂对药物经皮渗透的影响受药物理化性质、载体、促渗剂浓度以及其他多种因素的影响，其中促渗剂的影响较为显著，因此促渗剂对经皮给药系统的研制具有相当大的影响。透皮渗透剂通过打开新的渗透途径，增进类脂骨架无序性而增加皮肤的非均匀性，从而促进药物渗透。四氢胡椒碱可以促进药物有效成分快速有效的渗透，其作用机制是通过干扰皮肤角质层的细胞间脂质，增加脂质双层的流动性，这种增强的流动性可促进药物分子和活性物分子扩散通过脂质双层的碳氢化合物部位，增加药物分子/营养物质和细胞膜的亲和能力。

实验选用的促渗剂四氢胡椒碱、氮酮、二甲基亚砜，均具有不同的促渗机制。其中四氢胡椒碱不溶于水，为得到均匀的促渗剂溶液，选用95%的乙醇作溶剂，而95%的乙醇也有一定的促渗作用，因此实验采用95%乙醇作为对照。

考查透皮促渗剂的促渗作用采用体外透皮实验，以离体皮肤为屏障，考察药物的累计透过量，这种实验方法可以排除体内多种因素的干扰，重复性好，易于分析。但体外透皮实验结果的真实性和实验结论的可靠性有待研究。体外透皮实验体现不了机体完整统一的内环境和体液调节，研究结果与整体药效的相关性，也需要进一步考察[3]。本课题为选用促渗剂，开发辣椒碱经皮制剂提供实验依据，具有重大的社会效益和经济效益。

[1] 张鹏威.辣椒碱透皮微乳的研究[D].天津:天津大学,2009: 169-172.

[2] 张鹏威,张莉,徐贵华,等.促渗剂对辣椒碱经皮渗透的影响[J].海南医学院学报,2010,16(8):964-970.

[3] 顾圣莹,丁雪鹰,高静,等.透皮促渗剂对双乌跌打损伤药方体外透皮吸收和体内药效的影响[J].中国药学杂志,2009,44(8):607-611.

R97

A

1673-5846(2014)07-0021-02

1郑州市中医院，河南郑州 450007

2河南倍特生物科技有限公司，河南郑州 450007