王 芳，李晓静，周延清

(1．中州大学 a.实验管理中心 b.化工食品学院，郑州450044；2．河南师范大学 生命科学学院，河南 新乡453007)

随着生物工程及基因工程技术的发展，基于PCR(聚合酶链式反应)的分子标记技术也得到了迅速发展。目前在大豆种质资源研究方面应用的PCR分子标记主要有RAPD、ISSR、AFLP、RFLP等。这些标记虽然各有特点，但是效果[1]均不理想。2001年由美国加州大学蔬菜作物系Li和Quiros[2]博士提出相关序列扩增多态性(Sequence-Related Amplified Polymorphism，SRAP)分子标记，该标记是一种新型的分子标记技术，因其具有简便、中等产量、高共显性、重复性、易于分离条带及测序等优点，目前在很多植物中都得到了广泛的应用[3-4]，但在大豆研究[5]中未见报道。

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术是一种检测灵敏度和分辨率都很高的电泳技术，从聚丙烯酰胺凝胶中得到的DNA 纯度很高，特别适合于像SRAP这样的小DNA 片段的分析(5～500bp)，是分子生物学、生物工程及基因工程研究方面不可缺少的实验技术。因其具有设备相对简单，操作比较方便，时间短，样品量少等特点[6]，近年来被广泛应用于DNA的分析实验中。本文以大豆为实验材料，进行了大豆的SRAP-PCR扩增，并对产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染，建立了一种简便快捷的适合于大豆SRAP标记的PAGE银染检测方法。

1 材料与方法

1.1 试验材料

实验材料为豆科大豆属的133种大豆，品种由河南农业科学院梁凤珍、王树峰和周口农业科学院苑宝军研究员提供(见表1)。SRAP引物由上海生物工程技术服务有限公司合成(见表2)。

1.2 DNA提取及检测

将大豆下胚轴研磨成粉末，每个品种取3 g大豆粉末用CTAB法[7]提取总DNA。……