杜 杰，张志清，杨秀岭，刘秀菊，肖若璇

(1.河北省邢台市人民医院药剂科，邢台 054016；2.河北医科大学第二医院药学部，石家庄 050000；3.西北农林科技大学2011级本科生，西安 712100)

奥美拉唑为质子泵抑制剂，能显著抑制H+，K+-ATP酶，阻断胃酸分泌，从而减少溃疡创面扩大，促进黏膜组织再生，是一种新型、强效的抗溃疡药，临床主要用于十二指肠溃疡、胃溃疡、卓-艾综合征和反流性食管炎[1]。目前，奥美拉唑作为一种主要的质子泵抑制剂还被广泛应用于脑外伤、卒中、中枢神经系统感染等疾病，以达到预防应激性溃疡的目的。奥拉西坦是新一代脑代谢改善药，属于γ-氨基丁酸(GABA)的环形衍生物。本品可促进磷酰胆碱和磷酰乙醇胺的合成，提高大脑中三磷腺苷(ATP)/二磷腺苷(ADP)的比值，使大脑中蛋白质和核酸的合成增加，主要用于治疗脑损伤引起的记忆与智能障碍、老年性痴呆和神经功能缺失等疾病[1]。基于两药的药理作用，在脑外伤、卒中、细菌性或病毒性脑炎、一氧化碳中毒等疾病的治疗中，奥美拉唑和奥拉西坦存在联合用药的指征。但奥拉西坦是否会对奥美拉唑的体内代谢产生影响，目前尚无人体试验的研究资料。本研究采用HPLC法测定奥美拉唑血药浓度，考察奥拉西坦是否对奥美拉唑在健康志愿者体内的药动学产生影响，为两者联合用药的安全性评价提供理论依据。

1 材 料

1.1 仪器 Waters 高效液相色谱系统，包括515色谱泵、486紫外检测器、Empower Application 色谱工作站(美国Waters公司)；Diamonsil C18色谱柱(济南赛畅科学仪器有限公司)；GL-20G-Ⅱ 冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂)；XW-80A涡旋混合器(上海医科大学仪器厂)； HZ F-B1200万分之一电子天平(美国康州HZ电子有限公司)；CPA225D电子分析天平(德国Sartorius公司)；KL512J数控恒温水浴氮吹仪(北京康林科技有限公司)；AP-01抽滤器(天津市协同仪器有限公司)；KQ-300B超声清洗器(江苏省昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 药品和试剂 奥美拉唑肠溶胶囊(规格：20 mg/粒，产品批号ME 9000，分装批号1008075)、奥美拉唑对照品(含量99.60%，批号73139E09，阿斯利康制药有限公司)；卡马西平对照品(含量100.0%，批号H1426，北京诺华制药有限公司)；奥拉西坦胶囊(规格：0.4 g/片，批号128101207，石药集团欧意药业公司)；乙腈(色谱纯)、甲醇(色谱纯)、二氯甲烷(分析纯，天津市康科德科技有限公司)。

1.3 试验对象 本试验经河北医科大学第二医院药物临床试验伦理委员会批准。选择10例健康志愿者，年龄(21±1)岁，体重(63±5) kg。志愿者均不过量吸烟、饮酒，试验前2周未用任何药物。试验前向志愿者说明试验方案、药物特性及可能出现的药物不良反应(ADRs)，志愿者签署知情同意书。试验前、后均进行常规体检，血液生化检查，以及心、肝、肾功能检查。

2 方法和结果

2.1 色谱条件 Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5.0 μm)，柱温：25 ℃，流动相：乙腈-水(45∶55)，流速：1.0 ml/min，检测波长：302 nm，进样量：20 μl，以卡马西平为内标。

2.2 溶液的配制 (1)奥美拉唑对照品溶液：精密称取奥美拉唑对照品约10 mg，置50 ml棕色量瓶中，加0.01 mol/L NaOH溶液9 ml溶解，用蒸馏水定容，配制成浓度约为200 μg/ml的奥美拉唑对照品储备液，4 ℃避光保存。精密量取储备液5 ml置100 ml棕色量瓶中，用蒸馏水定容，得到10 μg/ml的奥美拉唑对照品溶液。(2)卡马西平对照品溶液：精密称取卡马西平对照品约10 mg，置100 ml棕色量瓶中，用蒸馏水定容，得100 μg/ml的卡马西平对照品储备液，4 ℃保存。取储备液适量，用蒸馏水稀释成4和2 μg/ml的卡马西平对照品溶液作为内标溶液。

2.3 给药方案及血样采集 10例男性健康志愿者随机分为2 组，每组5 人。试验组口服奥拉西坦胶囊0.8 g/次，对照组口服空胶囊，bid，连续服用6 d。志愿者于第6天20：00禁食，第7天8：00口服奥美拉唑肠溶胶囊40 mg，用100 ml温开水送服。服药2 h后可饮水，4 h后可进食低脂、低蛋白标准餐。志愿者于服药前及服药后0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、10、12 h取前臂静脉血3 ml，置5 ml棕色具塞玻璃试管中，用肝素钠抗凝，201.24×g离心10 min。取血浆1 ml置具塞试管中，-40 ℃避光保存。经2周洗脱期后，试验组和对照组交叉用药。试验过程中，对照组和试验组各有1 例志愿者分别由于发热和服用大环内酯类药物退出试验。

2.4 血浆样品预处理 冷冻血浆在室温下自然解冻，2.236×103×g离心5 min，取上清液0.5 ml，加磷酸盐缓冲液(pH=7.83)100 μl，加4 μg/ml内标溶液50 μl，混匀后加二氯甲烷5 ml，涡旋振荡1 min，201.24×g离心5 min，弃去上清液，取二氯甲烷层，在40 ℃水浴中以氮气流吹干[2]。用100 μl甲醇溶解残渣，混匀，作为供试品溶液。

2.5 专属性实验 取空白血浆、奥美拉唑对照品溶液、2 μg/ml内标溶液以及血浆样品处理液，分别按2.1项色谱条件进样测定，得到色谱图见图1。由图1可见，奥美拉唑和卡马西平的保留时间分别约为5.9和7.6 min，峰形良好，血浆内源性杂质不干扰测定。配制浓度约1 μg/ml的奥美拉唑对照品溶液，倍比稀释后进行测定，直至S/N≥10，测得该方法的最低定量限为0.005 μg/ml。

2.6 标准曲线的绘制 精密吸取2.2项的奥美拉唑对照品溶液适量，加入空白血浆中，得到奥美拉唑系列浓度为0.01、0.05、0.10、0.25、0.50、1.00、2.00、3.00 μg/ml的标准曲线工作液，按2.4项下方法预处理后进样测定。以奥美拉唑与卡马西平的峰面积比值(Y)对血药浓度(X)进行线性回归，得到标准曲线方程：Y=3.221X-0.015(r=0.999 9)，表明奥美拉唑血浆浓度在0.01～3.00 μg/ml范围内具有良好的线性关系。

图1 奥美拉唑的HPLC谱图

2.7 回收率和精密度实验 取空白血浆15 份，分为3 组，每组5 份，分别加入适量奥美拉唑对照品溶液，制备低、中、高浓度(0.05、0.25、2.00 μg/ml)血浆样品，按2.4项操作预处理，得到血浆样品溶液，按2.1项色谱条件进样测定。提取回收率=血浆样品溶液的峰面积/等浓度的奥美拉唑对照品溶液峰面积×100%。方法回收率=根据标准曲线方程计算的实际浓度/加入的理论浓度×100%。在同1 d内测定5 次，计算奥美拉唑的日内精密度；每天测定1次，连续测定5 d，计算日间精密度，结果见表1。

表1 奥美拉唑的回收率和精密度实验结果

Table 1 Results of recovery and precision tests of omeprazole

表1 奥美拉唑的回收率和精密度实验结果

(ρB/μg·ml-1)RSDRSD0．05 78．63±3．84 98．97±2．07 2．79 4．140．25 82．61±1．88 99．48±2．14 5．37 3．952．00 74．54±1．93 92．67±1．10 1．00 2．47

2.8 稳定性实验 取空白血浆，加入奥美拉唑对照品溶液适量，制备浓度为0.25 μg/ml的血浆样品共17 份，按2.4项操作预处理，得到血浆样品溶液，即刻进样测定。取5份血浆样品在室温放置1、2、3、4 h各测定1 次，考察血浆样品在室温下的稳定性，计算得到RSD=3.87%(n=5)。取6份血浆样品于-40 ℃避光保存4 d后测定浓度，计算得到RSD=2.10%(n=6)。取6份血浆样品反复冻融3 次后测定浓度，计算得到RSD=2.59%(n=6)。

2.9 药动学参数和药-时曲线 根据对照组和试验组各个时间点的血药浓度绘制药-时曲线，见图2。采用DAS 2.1.1药动学软件处理相关数据，自动拟合统计距，得到主要药动学参数见表2。采用SPSS 13.1统计学软件比较药动学参数的组间差异。对tmax、cmax、t1/2、AUC0～t和AUC0～∞分别进行正态性检验，结果均符合正态分布。采用两个独立样本的配对t检验进行分析，结果P值均>0.05。由此可以推断，健康志愿者服用奥拉西坦对奥美拉唑的药动学没有显著性影响。

图2 健康志愿者单剂量口服40 mg奥美拉唑胶囊后的平均血药浓度-时间曲线

表2健康志愿者单剂量口服40mg奥美拉唑胶囊后的主要药动学参数

Table2Mainpharmacokineticparametersofomeprazoleafterasingleoraldoseof40mgomeprazolecapsulesinhealthyvolunteers

tmax(t/h)cmax(ρB/μg·ml-1)t1/2(t/h)AUC0～t(A/mg·min·L-1)AUC0～∞(A/mg·min·L-1)2．31±1．10 1．14±0．77 1．50±0．83 3．32±3．08 3．33±3．232．00±0．85 1．32±0．60 1．66±0．69 3．69±3．15 3．79±3．29

3 讨 论

健康志愿者口服奥拉西坦后再服用奥美拉唑，对奥美拉唑的药动学参数无显著性影响。结果提示，在两药联合使用过程中无需调整药物剂量，为临床应用提供了理论依据。本研究结果与大鼠体内的实验数据不符[3]，其原因可能为种属差异，具体原因有待进一步的研究证实。奥美拉唑经肝脏P450酶系催化代谢，其主要的代谢途径为经CYP2C19酶代谢生成5-羟基-奥美拉唑，再经CYP3A4代谢生成5-羟基-磺基-奥美拉唑。CYP2C19酶活性是奥美拉唑药动学和药效学的重要影响因素[4]。本研究还可以间接证明，在人体内奥拉西坦对CYP2C19酶没有明显的促进或抑制作用。奥美拉唑的血药浓度个体间差异较大，原因是志愿者中存在CYP2C19基因表型多态性[5]。奥美拉唑在碱性条件下稳定，故本研究配制奥美拉唑对照品储备液时，以0.01 mol/L的NaOH溶液溶解，既可以增大奥美拉唑的溶解度，又可以增加其稳定性。奥美拉唑为苯并咪唑类衍生物，见光不稳定，易分解[6]。因此血浆样品应置于棕色具塞试管中，保存在自制避光盒内，处理和测定过程均要求严格避光。稳定性实验结果表明，采取上述避光措施，基本可满足实验要求。

【参考文献】

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[3] 杜 杰，张志清，杨秀岭，等.奥拉西坦对奥美拉唑在大鼠体内药代动力学的影响[J].药物分析杂志，2013,33(12)：2109-2113.

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