彭词艳，胡 焰,2，王 霞,2，易利丹，彭六保，李健和*

(1.中南大学湘雅二医院药学部，长沙 410011；2.中南大学药学院，长沙 410013)

冠脉宁片由丹参等14味中药材组成，具有活血化瘀、行气止痛之功效，主要用于胸部刺痛、固定不移、入夜更甚、心悸不宁、舌质紫暗、脉沉弦为主症的冠心病、心绞痛、冠状动脉供血不足等，临床应用多年安全有效[1,2]。该品种原载于卫生部药品标准中药成方制剂[3]，原质量标准仅有药物性状，以及丹参、葛根、血竭和冰片等药材的薄层色谱鉴别和检查项，不能全面地控制药品的质量。为保证本品临床应用效果及产品质量，作者根据该方中药物的理化性质及中医药传统制剂的特点，在原部颁标准的制备工艺和质量标准基础上，参考文献[4-6]，在质量标准中增加鸡血藤的薄层鉴别和丹参素的含量测定，制备工艺的优化另文报道。

1 仪器和试药

LC-10ATvp高效液相色谱仪、SPD-10Avp紫外检测器(日本岛津公司)；AE200电子分析天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)。冠脉宁片(规格：0.31 g/片，批号 20120508、20120524、20120526、20120923、20120925、20120927、20120929、20121020、20121022、20121024、20130201、20130203、20130205，中南大学湘雅二医院药学部研制)；丹参素钠对照品(批号 0855-201102，中国食品药品检定研究院)。甲醇(色谱纯，美国Tedia公司)；乙酸乙酯(天津市博迪化工有限公司)；乙醇(天津市永大化学试剂有限公司)；三氯甲烷(深圳市华昌化工有限公司)；甲酸(湖南省衡阳市有机化学试剂厂)；硬脂酸镁(湖南华日制药有限公司)；水为重蒸馏水；其他试剂均为分析纯。硅胶G板(青岛海洋硅胶干燥剂有限公司)。

2 方法和结果

2.1 冠脉宁片的制备 按如下处方和制备工艺制备冠脉宁片。

2.1.1 处方 丹参112.5 g，没药(炒)25.5 g，鸡血藤112.5 g，血竭25.5 g，延胡索(醋制)45 g，当归45 g，郁金45 g，制何首乌75 g，桃仁(炒)30 g，黄精(蒸) 75 g，红花30 g，葛根112.5 g，乳香(炒)25.5 g，冰片4.5 g。上述药材均购自湖南三湘中药饮片有限公司，经中南大学湘雅二医院药学部中药房王玉花副主任药师鉴定。

2.1.2 制备工艺 取上述处方量的冰片研细；葛根、乳香、没药、血竭、郁金、延胡索粉碎成细粉，过80目筛备用；丹参、鸡血藤、当归、制何首乌、桃仁、黄精、红花加水煎煮2次，第1次加10倍量水煎煮3 h，第2次加8倍量水煎煮2 h，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩(75 ℃，-0.06 mPa)至相对密度为1.25(60 ℃测)的稠膏，与上述葛根等细粉混合，真空干燥(70 ℃，-0.06 mPa)。将干燥的提取物粉碎成细粉，过80目筛，混匀，加80%乙醇适量制成软材，使用20目筛网制成颗粒，60 ℃干燥，加入冰片4.5 g及硬脂酸镁1.5 g，混匀，压片，包薄膜衣，制成1000片，即得。本品系将原糖衣片改为薄膜衣片，在沿用原质量标准的基础上，将性状修订为：本品为薄膜衣片，除去包衣后显红棕色，味微苦、辛。

图1 鸡血藤的TLC图

2.2 鸡血藤的薄层鉴别 取本品10片，除去包衣，研细，加甲醇50 ml，加热回流提取1 h。放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加重蒸馏水30 ml使溶解，用乙酸乙酯提取3次，每次20 ml，合并乙酸乙酯提取液，置水浴上蒸干。残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取鸡血藤对照药材1 g，加水煎煮30 min。放冷，滤过，滤液用乙酸乙酯提取2次，其余操作同供试品溶液，得鸡血藤对照药材溶液。再取除鸡血藤外的其余处方量药材，按制备工艺制成阴性样品，同法制成阴性样品溶液。按照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录Ⅵ B薄层色谱法实验，吸取上述3种溶液各10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(6∶3∶0.3)为展开剂，展开。取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下观察。结果显示，供试品溶液和鸡血藤对照药材溶液的薄层板上相同位置处显示有淡蓝色的荧光斑点，而缺鸡血藤的阴性样品则不含此斑点，如图1所示。说明冠脉宁片中的阴性样品对鸡血藤的薄层鉴别不产生干扰，故可在原质量标准中增加鸡血藤的薄层鉴别。

2.3 丹参素的含量测定

2.3.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18柱 (200 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相：甲醇-1%冰乙酸(10∶90)，流速：1.0 ml/min，检测波长：280 nm。理论塔板数按丹参素峰计算应不<2500。

2.3.2 溶液制备 (1) 供试品溶液：取本品20片，除去包衣，研细，取约0.8 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25 ml，称定重量，超声处理(200 W，40 kHz)30 min。放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。(2) 对照品溶液：精密称取丹参素钠对照品5.95 mg，置50 ml容量瓶中，加50%甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀；然后再从中精密量取5 ml，置10 ml容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度为53.55 μg/ml的丹参素钠对照品溶液。(3) 阴性溶液：取除丹参外的其余处方量药材，按制备工艺制成缺丹参的阴性样品，同法制成缺丹参的阴性样品溶液。

分别精密量取上述供试品、对照品、阴性样品溶液各5 μl，注入HPLC仪，按2.3.1项进行检测，结果如图2所示。在该色谱条件下，丹素素的保留时间为15.5 min，阴性样品溶液在该保留时间处不出峰，表明冠脉宁片中的其他成分对丹参素的测定无干扰。

图2 冠脉宁片的HPLC谱图

2.3.3 标准曲线的绘制 分别精密吸取浓度为0.107 1 mg/ml的丹参素钠对照品溶液1、3、5、7、9 ml，分别置10 ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取5 μl进样，测定其峰面积(A)，以浓度(c)为横坐标，A为纵坐标，绘制标准曲线，得丹参素回归方程为：A=510 502.4c-696.3(r=0.999 9)。结果表明，在10.71～96.39 μg/ml 范围内，丹参素浓度与峰面积线性关系良好。

2.3.4 精密度和稳定性实验 精密吸取同一供试品溶液(批号 20120524)5 μl，重复进样5次，测定其峰面积，结果其平均峰面积为149 265.406，RSD为0.53%(n=5)，表明本法精密度良好。分别精密吸取供试品溶液(批号 20120524)5 μl，于0、2、4、8、10 h进样，测定其峰面积，结果其平均峰面积为149 383.512，RSD为0.62%(n=5)。表明供试品溶液在8 h内基本稳定。

2.3.5 重复性实验 取同一批样品(批号 20120524)5份，按上述条件平行处理并测定，结果其平均含量为0.539 1 mg/片，RSD为0.94%(n=5)，表明本法重复性良好。

2.3.6 回收率实验 精密称取已知丹参素含量为1.793 5 mg/g的供试品(批号 20120524)约0.4 g，精密加入丹参素钠对照品溶液(0.086 8 mg/ml)10 ml，即0.868 mg，再精密加入甲醇15 ml，按上述含量测定项下的方法测定含量，测得其平均回收率为98.72%，RSD为0.82%(n=3)，表明本方法加样回收率良好。

2.3.7 样品含量测定 按拟定的含量测定方法，测定10批样品中的丹参素的含量，结果见表1。10批样品中丹参素含量的平均值为0.545 mg/片，RSD为2.05%。按平均含量的75%折算，暂定本品的含量限度为每片中丹参素含量不得<0.40 mg。

表1 10批样品丹参素含量测定结果

3 讨 论

本研究的薄层色谱实验结果表明，供试品色谱中含有与鸡血藤对照药材相同的斑点，且其他成分不干扰，故将鸡血藤的薄层鉴别收入质量标准正文中。供试品薄层色谱中未出现与延胡索、郁金、制何首乌、桃仁等对照药材或对照品色谱相同的斑点，故这些药材的薄层鉴别不能作为质量标准而被收入。采用HPLC法对冠脉宁片中的丹参素含量进行测定，其他成分对测定结果无干扰，方法学考察结果表明线性关系良好，精密度、回收率及重复性均较好，可用于本品的质量控制，规定其限度为每片中丹参素含量不<0.40 mg。

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