谭汉添 詹利之

HPLC测定二甲双胍格列美脲胶囊中的格列美脲含量

谭汉添 詹利之

目的采用 HPLC方法测定二甲双胍格列美脲胶囊中格列美脲的含量。方法色谱柱采用 Diamonsil C18( 200 mm × 4.6 mm, 5 μm) , 流动相为 0.05 mol/L甲酸铵缓冲液(pH 4) - 乙腈( 体积比为41∶63) , 检测波长为228 nm, 流速10 ml/min。结果格列美脲的平均回收率为99.4% ( RSD = 1.0% , n =9) , 线性范围为 0.1～0.6 mg/L(r=0.9991, n=6)。结论采用 HPLC方法测定二甲双胍格列美脲胶囊中格列美脲的含量, 方法简便、拥有较高准确性、专属性, 且在测定过程中测量结果并不会受到盐酸二甲双胍的干扰, 效果较好, 可以应用到对该类复方制剂的质量控制过程中。

格列美脲含量；二甲双胍；高效液相色谱法

作为第3 代磺脲类口服降糖药, 针对呈渐进性发展的2型糖尿病的特点, 起效迅速、长效、高效、用量小、低血糖发生率低等是格列美脲所特有的优点。为了可以有效控制患者血糖, 临床上往往采用不同作用机制的药物联合疗法对患者进行针对治疗［1］。二甲双胍格列美脲胶囊往往会含有较高含量的盐酸二甲双胍, 而格列美脲含量则较小的特点, 作者使用HPLC 法对胶囊中格列美脲含量进行准确的测量。该方法灵敏、准确且不复杂, 可以有效避免盐酸二甲双胍对格列美脲测定的干扰。现将报告总结如下。

1 仪器与材料

SPD-20A 紫外可见光检测器、LC-20A 高效液相色谱仪、LCsolution 色谱工作站( 日本 Shimadzu公司) 。无水磷酸氢二钠( 分析纯, 天津瑞金特化学品有限公司) , 磷酸(分析纯,沈阳经济技术开发区试剂厂), 十二烷基硫酸钠(分析纯, 天津博迪化工股份有限公司), 重蒸水(实验室自制) , 二甲双胍格列美脲胶囊( 实验室自制, 每片标示量格列美脲 2.0 mg, 盐酸二甲双胍 500 mg), 格列美脲对照品( 批号 100674-201102,中国药品生物制品检定所) 、盐酸二甲双胍对照品( 批号100664-200602, 中国药品生物制品检定所) , 乙腈( 色谱纯,天津康科德科技有限公司) 。

2 方法与结果

2. 1色谱条件和系统适用性试验 色谱柱： Diamonsil C18(200 mm ×4.6 mm, 5 μm), 流动相为0.05 mol/L甲酸铵缓冲液( pH 4)-乙腈(41：63), 检测波长228 nm, 保持25℃柱温, 进样量25 μl。盐酸二甲双胍与格列美脲的分离度为 6.2, 保证两者达到完全分离。

2. 2溶液的配制 取标示量盐酸二甲双胍500 mg、格列美脲2 mg的二甲双胍格列美脲胶囊10粒, 取出内容物并研细,精密称定［2］。按照50∶50的体积比加乙腈-水共 90 ml, 置于 100 ml 量瓶中, 首先利用频率 59 kHz, 功率250 W的超声处理40 min 然后后冷却至室温, 若未至刻度线则继续加乙腈-水(体积比50∶50) 稀释至刻度, 并摇匀, 滤过。精密量取续滤液1 ml, 置于50 ml量瓶中, 然后用体积比30：70的乙腈-水溶液稀释至刻度, 摇匀, 作为供试溶液。

2. 3线性关系考察 精密称取格列美脲10 mg , 置于100 ml量瓶中, 加适量甲醇, 溶解使用超声处理, 待冷却至室温后加甲醇定容。精密量取 0.5、1.5、2.5、3.5、5. 0、10.0 ml, 分别置 50 ml 量瓶中, 用流动相定容。记录峰面积时分别精密量取 50 μl 上述系列溶液进样。以峰面积对浓度 ( μg/ml) 进行线性回归, 得回归方程为: Y=161.32X -3.25(r=0.9999), 结果表明: 1.121～ 21.245 μg/ml格列美脲与峰面积的线性关系良好。

分别精密量取混合储备液0.5、1.0、1.5、2. 0、2.5、3.0 ml,置 10 ml 量瓶中, 用体积比 30∶70的乙腈-水溶液稀释至刻度, 摇匀, 配制成含格列美脲质量浓度为 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mg/L及盐酸二甲双胍质量浓度为 25.0、50.0、75.0、100.0、125.0、150.0 mg/L的系列标准溶液。按“2.1”条色谱条件测定, 记录色谱图。以样品质量浓度(ρ) 为横坐标,以峰面积(A) 为纵坐标, 计算格列美脲和盐酸二甲双胍的线性回归方程分别为 A =59.41ρ+ 0.5941(r=0.9993, n=6) 和A = 84.75ρ- 61.23(r=0.9997, n=6)。结果表明, 格列美脲和盐酸二甲双胍质量浓度分别在 0.1～0.5 mg/L和 25.0 ～155.0 mg/L内与峰面积呈良好的线性关系［3］。

2. 5回收率试验 在分别取盐酸二甲双胍和格列美脲对照品适量后, 按处方比例加入空白辅料, 按照质量分数分别为80%、100%、120% 及供试品处方量中主药成分含量配制成供试溶液, 每个质量浓度配制 3 份, 结果均符合测定要求,结果见表 1。

表1 回收率试验结果(mg, n =9)

3 讨论

方制剂。盐酸二甲双胍可以降低血糖主要是通过降低肝糖输出, 同时增加外周胰岛素敏感性导致的［4］; 格列美脲则是通过增加体内胰岛素水平和敏感性进而降低血糖。两药可以联合应用于单纯饮食和锻炼不能控制血糖的2 型糖尿病患者。

曾选择甲醇和乙腈作为提取溶剂, 结果发现: 对甲醇、甲酸铵、乙酸铵缓冲液和乙腈进行流动相组成及比例考察时,发现作为流动相, 甲酸铵缓冲液 -乙腈测定得到的格列美脲色谱峰的峰形最好, 同时盐酸二甲双胍对格列美脲干扰较小。并且乙腈在流动相中的比例, 会影响格列美脲的出峰时间。当甲酸铵缓冲液 - 乙腈体积比例为 41:63时, 格列美脲在 8 min 出峰, 可以最大限度的分离盐酸二甲双胍与格列美脲［5］。用甲醇提取两组分的色谱峰响应值都较高, 同时在测定格列美脲含量的过程中可以通过调节流动相的组成使盐酸二甲双胍不干扰测定。选定适当的色谱条件, 可以将盐酸二甲双胍和格列美脲较好地分离并且出现较为满意的峰形。HPLC方法可以有效、简便的测定二甲双胍格列美脲胶囊中格列美脲的含量。

［1］ 刘伟, 严洁.地特胰岛素联合格列美脲治疗老年 2 型糖尿病疗效观察.现代中西医结合杂志, 2012, 21(10):1065-1066.

［2］ 王秀荣. 瑞格列奈联合甘精胰岛素治疗老年 2 型糖尿病及其安全性分析.南方医科大学学报, 2010, 30(7):1707-1708.

［3］ 童向前.地特胰岛素联合格列美脲片治疗老年 2 型糖尿病的有效性及安全性.中外医疗-药物与临床, 2012, 10(26):99-100.

［4］ 曲 颖, 张纯利, 胡文娟, 等.西格列汀、罗格列酮分别联合二甲双胍治疗老年 2 型糖尿病的疗效观察.现代生物医学进展, 2013, 13(21):4077-4080.

［5］ 刘庆丰, 李中东, 施孝金, 等.二甲双胍格列本脲片中两种成分的离子对HPLC法测定.药学服务与研究 , 2009, 09(01)：44-47.

510000 广州中医药大学第一附属医院(谭汉添)；广州中医药大学青蒿研究中心(詹利之)