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实验研究

Vav-Cre介导的YFP报告基因系统标记小鼠NK细胞的特异性和效率检测

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目的 探索Vav-Cre介导的黄色荧光蛋白（YFP）报告基因系统标记小鼠体内自然杀伤（NK）细胞的特异性和效率。方法通过基因型分型筛选ROSA26R-YFP与Vav-Cre小鼠杂交后代中双阳性基因型小鼠，流式细胞术分析免疫器官淋巴结、脾、胸腺以及骨髓细胞的YFP表达效率，通过细胞表面抗体标记淋巴结、脾及骨髓的NK细胞，流式细胞术分析NK细胞群体中YFP阳性细胞百分比。结果ROSA26R-YFP与Vav-Cre小鼠杂交后代共17只，双阳性基因型小鼠（ROSA26R-YFP（+/-）Vav-Cre）11只；流式细胞术分析淋巴结、脾、胸腺、骨髓细胞中YFP阳性细胞的百分比（％）分别为73.87±1.51、56.07±1.47、86.17±1.74、53.60±3.56，阴性对照组相应器官分别为0.27± 0.01、1.33±0.91、0.11±0.01，0.29±0.03，差异有统计学意义（均P＜0.01），两种类型小鼠非免疫器官肾中均无明显YFP表达（双阳性鼠0.72％±0.43％，对照鼠0.92％±0.27％，P＞0.05）；淋巴结、脾和骨髓中NK细胞YFP阳性百分比（％）76.94±0.84、81.66±1.18、88.92±0.77，与阴性对照组比较均明显增高（均P＜0.01）。结论Vav-Cre介导的YFP报告基因系统标记小鼠体内NK细胞具有特异性及高效性。

杀伤细胞,天然；免疫系统；基因,报告；小鼠,转基因；杂交,遗传；黄色荧光蛋白；Cre重组酶

自然杀伤（NK）细胞是一群不同于T细胞、B细胞的大颗粒淋巴细胞[1]，可通过释放颗粒物和细胞因子直接杀伤肿瘤和受病原微生物感染的细胞，是免疫治疗及各种肿瘤治疗研究的新热点[2]，但其发育分化机制尚不明确。利用基因敲除小鼠研究NK细胞发育是非常有效的手段。Vav-Cre转基因小鼠是介导造血系统特异性基因敲除的常用工具鼠[3]，但基因敲除效率的检测具有一定局限性。……