金红军，娄卫华

（郑州大学第一附属医院耳鼻咽喉-头颈外科，河南郑州450052）

喉鳞癌组织中Oc t-4mRNA的表达及意义

金红军，娄卫华

（郑州大学第一附属医院耳鼻咽喉-头颈外科，河南郑州450052）

目的探讨Oct-4 mRNA在喉鳞癌组织中的表达及意义。方法采用RT-PCR和荧光定量PCR检测48例喉鳞癌及其癌旁正常喉黏膜组织中Oct-4 mRNA的表达。结果RT-PCR显示Oct-4 mRNA在喉鳞癌组织中的阳性率为64.6%，荧光定量PCR显示喉鳞癌组织中Oct-4 mRNA的相对表达量为0.533± 0.142，而癌旁正常喉黏膜组织未检测出Oct-4基因的表达（P＜0.01）。Oct-4 mRNA在喉鳞癌高分化组阳性率为33.3%，显著低于中、低分化组的69.0%（P＜0.05）；无淋巴结转移组阳性率为47.8%，显著低于有淋巴结转移组的80.0%（P＜0.05）；Ⅰ、Ⅱ期组阳性率为47.4%，低于Ⅲ、Ⅳ期组的75.9%（P＜0.05）。荧光定量PCR结果显示Oct-4基因的相对表达量随着喉鳞癌组织分化减低、淋巴结转移和高的临床分期而显著增加（P＜0.05）。结论Oct-4基因的高表达可能参与了喉鳞癌的发生、发展，并对判断喉鳞癌患者的生物学行为有一定意义。

喉鳞癌；Oct-4 mRNA；RT-PCR；荧光定量PCR

肿瘤的发病率近年来逐渐上升，严重威胁着人类的健康和生命，已成为继心血管病之后人类第2大致死原因［1］。喉癌约占耳鼻喉科肿瘤的1/3，是头颈部最常见的恶性肿瘤，尤其是近年来随着环境污染的加剧，其发病率呈上升趋势，并且呈现年轻化的趋势［2-3］。喉癌的发病部位较为隐蔽，同时肿瘤的异质性也会导致临床病理分期在预后评估方面有一定局限性，因此，明确喉癌相关基因，以利于喉癌的早期诊断和预后判断是一个需要解决的问题。研究［4］显示，肿瘤细胞内存在有一小群具有高增生潜能和自我更新潜能的起始细胞被称为肿瘤干细胞，是肿瘤发生的根源，其相关的基因在喉癌的发生、发展中也起到关键的作用。研究［5-6］发现，Oct-4在肿瘤干细胞特性的维持中发挥一定的作用。本研究检测了喉鳞癌组织中Oct-4基因的表达情况，以探讨Oct-4检测的临床价值。

1 材料与方法

1.1 临床资料收集我院2007年1月至2010年12月耳鼻咽喉科手术切除标本48例，所有病例经病理证实为喉鳞癌，其中男41例，女7例，年龄39～71（58.3 ±13.4）岁，每例另取癌旁正常喉黏膜组织作为对照。根据1997年UICC TNM分期标准所有病例分为：Ⅰ期7例，Ⅱ期12例，Ⅲ期14例，Ⅳ期15例；高分化6例，中、低分化42例；有颈淋巴结转移25例，无颈淋巴结转移23例。

1.2 主要试剂Trizol为北京天根生物科技公司产品，RT-PCR和荧光定量检测试剂盒购自美国ABI公司，PCR引物由深圳华大基因公司合成。

1.3 组织总RNA提取及cDNA第一链的合成取50 mg手术切除标本，按照试剂盒说明书使用Trizol提取细胞总RNA。按照RT-PCR试剂盒说明书合成cDNA第一链。样品-70℃冻存。

1.4 RT-PCR按照RT-PCR试剂盒说明书扩增Oct-4片段。Oct-4（194 bp）：Sence：AGCAACTCCGATGGGGCCTCC，Antisence：GCCCCACATCGGCCTGTG；GAPDH（205bp）：Sence：5′-GGTTCCGGATCGATTTTGGG-3′，Antisence：5′-GCCTTGGATAGTTAATCGT-3′。94℃预变性3 min；94℃40 s，60℃40 s，72℃1 min，30个循环；72℃10 min。

1.5 荧光定量PCR按照荧光定量检测试剂盒说明书操作检测Oct-4 mRNA的表达量，引物序列同RTPCR，反应条件为：95℃ 15 s，60℃ 1 min，30个循环。Ct值说明基因扩增达到阈值的循环数，△Ct值=目的基因Ct值-内参基因Ct值，目的基因的表达量采用2 -△Ct评估。

1.6 统计学处理采用SPSS 16.0处理数据，计量资料以s表示，2组样本均数间的比较使用t检验，多组均数间的比较使用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验，计数资料比较采用χ2检验，检验水准α= 0.05。

2 结果

2.1 喉鳞癌组织及癌旁组织中Oct-4 mRNA表达的差异RT-PCR结果显示48例喉鳞癌组织中有31例检出Oct-4 mRNA的阳性表达，占64.6%，而癌旁正常喉黏膜组织未检测出Oct-4 mRNA的表达（P＜0.05）（图1）。荧光定量PCR结果也显示喉鳞癌组织中Oct-4基因的相对表达量为0.533±0.142，而癌旁正常喉黏膜组织的荧光值都在基线水平（P＜0.05）。

图1 鳞癌及癌旁组织中Oct-4基因RT-PCR结果

2.2 喉鳞癌组织中Oct-4 mRNA表达与临床病理参数的关系见表1。

表1 喉鳞癌组织中临床指标与Oct-4 mRNA表达的关系

3 讨论

Oct-4是一个新发现的转录因子，属于POU家族成员，其表达的蛋白可以结合到相应目的基因启动子的PORF或MORF序列而发挥转录因子的作用，调节下游靶基因的转录、表达，健康个体中Oct-4呈低表达状态，主要参与个体的胚胎发育过程以及干细胞的自我更新和多能性的维持［7］。近期的研究［8］显示Oct-4在乳癌、肺癌、前列腺癌等多种实体肿瘤组织中高表达，参与了上述肿瘤的发生、发展，并且可以作为肿瘤干细胞的一个标志蛋白。肿瘤干细胞是目前肿瘤学的一个新概念，认为是肿瘤的起源细胞，同时也是肿瘤耐药和复发的根源［9］。

Oct-4基因表达水平与一些恶性肿瘤发生和生物学行为的密切关系已被多数研究者所证实［10］。本研究结果也显示，喉鳞癌组织中Oct-4 mRNA阳性率为64.6%，而癌旁正常喉黏膜组织未检测出该基因的表达，提示Oct-4基因的表达可能参与了喉鳞癌的发生，这一发现与前人在其他肿瘤中的研究结果相一致，同时也暗示了Oct-4基因在恶性肿瘤中的检测意义重大，有可能成为肿瘤早期筛查、诊断及预后评估的有效标志。本研究结果还显示，喉鳞癌组织中Oct-4基因的表达与肿瘤的分化程度、有无颈淋巴结转移、临床分期关系密切；荧光定量PCR结果显示Oct-4的相对表达量随着喉鳞癌组织分化程度减低、有淋巴结转移和高的临床分期而显著增加，提示Oct-4基因在喉鳞癌的恶性程度判定上是一个敏感指标，可能预示患者的预后。

综上所述，Oct-4基因在喉鳞癌的发生、发展中起到一定的作用，在肿瘤的分级以及预后判断等方面具有一定的意义。

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Expression and Significance of Oct-4 Gene in Laryngeal Squamous Cell Carcinoma

Jin Hongjun，Lou Weihua
（Department of Otorhinolaryngology，the First Affiliated Hospital，Zhengzhou University，Zhengzhou 450052，China）

ObjectiveTo investigate the expression and significance of Oct-4 mRNAi n laryngeal squamous cell carcinoma.MethodsRT-PCR and fluorescence quantitative PCR were used to detect Oct-4 mRNA expressions in the 48 cases of laryngeal squamous cell carcinoma tissues and paraneoplastic nomal mucosa tissues.ResultsThe result of RT-PCR showed that the positive rate of Oct-4 mRNAw as 64.6%in the laryngeal squamous cell carcinoma tissues，the result of fluorescence quantitative PCR showed that the amount of Oct-4mRNA in the laryngeal squamous cell carcinoma tissues was 0.533±0.142，while no Oct-4 mRNAw as found in the paraneoplastic normal mucosa tissues（P＜0.05）.The expression rate of Oct-4 mRNA in the well differentiated laryngeal squamous cell carcinoma tissues（33.3%）was lower than that in the medium and poor differentiated laryngeal squamous cell carcinoma tissues（69.0%）（P＜0.05）.The expression rate of Oct-4 mRNA in the no lymph node metastasis group（47.8%）was lower than that in the lymph node metastasis group（80.0%）（P＜0.05）.The positive expression rate of Oct-4 mRNA inⅠ-Ⅱphase（47.4%）was lower than that in theⅢ-Ⅳ phase（75.9%）（P＜0.05）.The result of fluorescence quantitative PCR showed that the amount of Oct-4 mRNA in the laryngeal squamous cell carcinoma tissues was obviously increased with the lower differentiation，the lymph node metastasis and higher clinical stages.ConclusionThe overexpression of Oct-4 mRNA may be associated with the carcinogenesis and development of laryngeal squamous cell carcinoma，and can be used for judging its biological behavior.

laryngeal squamous cell carcinoma；Oct-4 mRNA；RT-PCR；fluorescence quantitative PCR

10.3969/j.issn.1673-5412.2014.03.002

R739.65；R730.23

A

1673-5412（2014）03-0190-03

2013-07-12）

金红军（1965-），男，博士，主任医师，主要从事耳鼻咽喉科临床工作。F-mail：jinhongjun1@126.com