孟 浩 彭 贞 王 闯 刘瑞兰 高庆华

RNA分子的提取是分子生物学研究中一项的基本内容，是进行基因表达分析的基础［1］。随着分子生物学技术的迅猛发展及在医学领域中的普及，以RNA为研究对象的分子生物学实验与日俱增。外周血作为常用的理想实验材料，由于取材方便，且不需组织匀浆等客观因素的影响，可用作分子印迹和病毒学研究的对象［2］，而被广泛应用。血液总RNA提取所采用的Trizol法常作为RNA提取的方法之一，这与Trizol试剂本身能有效的从细胞或组织中直接提取RNA，并且在实验中降低血液中含有的RNA酶污染，防止RNA酶对RNA的降解有关。这也正是保证所得RNA片段完整的关键。

大量的研究实验证明:虽然提取RNA的方法很多，但是其基本都是把细胞破碎以后，以除去材料中糖、蛋白质、DNA等杂质为目标。而且材料自身物理化学性质的不同，不同的材料需要不同的提取方法［3～5］。但在分离血液总RNA所采用的不同抗凝血液在实际运用的效果甚少。本文正是利用在不同抗凝血液和红细胞裂解前后的对比。从而，获得最佳质量总RNA和实用的提取方法。

1 材料与方法

1.1 材料

羊外周静脉血，采自塔里木大学动物科学学院动物实验站，分别用ACD和肝素钠作为血液抗凝试剂。

1.2 试剂

DEPC水:1:1 000比例DEPC加入超纯水。常温下，磁力搅拌3～4 h，10～11 h静置孵育，121℃、30 min灭活。

ACD:柠檬酸 4.8 g、柠檬酸钠13.2 g、葡萄糖14.7 g定容于1 L的无酶水红细胞裂解液:氯化铵8.29 g、碳酸氢钾 1 g、EDTA 0.037 g定容于1 L 的无酶水Trizol试剂、氯仿、异丙醇、无水乙醇、75%乙醇无酶水配置。

1.3 方法

1.3.1 经典Trizol法直接提取血液总RNA