涂鄂文 刘秋庭 谭 莉

(湖南省脑科医院神经内科，湖南 长沙 410007)

本研究从ERS的角度研究ERS经典标志物GRP78和GADD153在脑出血大鼠表达的变化，以明确ERS在脑出血后继发的神经损伤的病理生理过程中的意义。为通过干预内质网应激治疗脑出血提供新的理论依据。

1 材料与方法

1.1材料 将正常成年SD大鼠50只(健康3个月龄体质量250±15g清洁级)随机分为2组：假手术组(A组)、脑出血组(B组)。

1.2方法 正常成年SD大鼠，参照Xue方法[1]，制备脑出血模型。假手术组以同样方法注入灭菌生理盐水50 μl。术后根据Longa法[2]进行神经功能缺损评分，无神经功能缺损症状、意识丧失、死亡大鼠被剔除。

各组分别在术前和术后各相应时间点(24小时、48小时、72小时，5天，7天)按Garcia等方法[3]进行神经功能评分。

将各时间点大鼠予以急性断头取脑，用无菌生理盐水冲去多余血液，沿冠状缝及矢状缝去除顶骨及顶间骨，充分暴露大鼠脑组织，取出整个大脑，切取血肿周围5 mm以内脑组织，置于液氮罐中保存，待标本收集齐后再分别予以匀浆，加入样本总体积5～10倍的组织裂解液，冰上裂解30 min；4℃，12000 r/min离心15 min(提前开离心机预冷)；将离心后的上清液小心吸取转移至另一离心管中，标记好动物编号、蛋白性质及提取时间。提取的蛋白在未变性之前冻存于-80℃冰箱保存。

Western-Blot检测：采用胞核-胞浆蛋白裂解液裂解蛋白，BAC法蛋白定量。上样后SDS-PAGE凝胶电泳；湿转法转PVDF膜；一抗(1∶200)4℃孵育过夜后二抗孵育，ECL试剂发光显影成像；光片于凝胶成像系统下白光扫描，进行吸光度分析，用同一标本内参进行校正，并按公式相对值=目的条带表达强度/tubulin表达强度计算出相对值。……