温见翔，陈 娟，杨 虹

（北京大学深圳医院 检验科，广东 深圳518036）

阴沟肠杆菌是临床常见的条件致病菌之一，亦是医院获得性感染的重要病原菌［1］。近年来，随着广谱抗菌药物的广泛使用，阴沟肠杆菌在抗生素的选择性压力下出现高耐药性和多重耐药。阴沟肠杆菌感染已成为医院感染的重要致病菌之一。我院阴沟肠杆菌感染分布与耐药状况亦不容乐观［2］，本研究通过检测我院临床分离的141株阴沟肠杆菌AcrAB－TolC外排系统acrA，acrB，tolC和acrR 4种基因，分析4种基因的携带分布，研究AcrAB－TolC外排系统基因与阴沟肠杆菌耐药性之间的关系。

1 材料与方法

1.1菌株鉴定与药敏试验2010年5月至2013年6月从北京大学深圳医院门急诊及住院部患者痰液、尿液、血液、脓液、胆汁等标本分离到的阴沟肠杆菌共计141株。所有菌株经 MicroScanWalkaway40细菌分析仪进行鉴定和药敏试验，测其对各种抗生素的最小抑菌浓度（MIC）。同一患者同一部位分离出的阴沟肠杆菌，如药敏结果相同，仅采用首次分离菌株。以大肠杆菌ATCC 25922、铜绿假单胞菌ATCC27853为质控菌株，药敏结果依据CLSI2013年执行标准判定。

1.2仪器与试剂美国德灵公司生产的 MicroScanWalkaway40型全自动细菌分析系统及该公司提供的阴性菌复合板；PCR扩增仪为美国Biosytems公司产品；凝胶成像系统为美国BIO－RAD公司产品质；标准分子量DNA、Taq DNA聚合酶、pMD18－T载体、DNA胶回收试剂盒为TAKARA公司产品。

1.3AcrAB－TolC外排系统基因的扩增根据AcrAB－TolC外排系统acrA，acrB，acrR和tolC 4种基因序列，设计PCR引物，并由TAKARA公司合成引物，引物序列及产物长度见表1。采用煮沸法提取各株阴沟肠杆菌基因组的DNA，进行PCR扩增。……