王亚静，邓红，张蜀，黄学峰

(1.广东药学院药物研究所/广东省药物新剂型重点实验室，广州 510006；2.广东丽峰药业有限公司，广州 510931)

超高效液相色谱法测定氨氯地平贝那普利胶囊中两种成分的含量*

王亚静1，邓红1，张蜀1，黄学峰2

(1.广东药学院药物研究所/广东省药物新剂型重点实验室，广州 510006；2.广东丽峰药业有限公司，广州 510931)

目的 建立氨氯地平贝那普利胶囊中两种成分的含量测定方法。方法采用超高效液相色谱(UPLC)法,色谱柱为BEH-C18柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm);流动相为甲醇∶水∶甲酸=65∶35∶1;流速为0.2 mL·min-1;检测波长为240 nm;柱温为30℃;进样量为2 μL。结果苯磺酸氨氯地平与盐酸贝那普利可达到较好分离,苯磺酸氨氯地平(按氨氯地平计)质量浓度在5.14～51.40 μg·mL-1内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9),盐酸贝那普利的质量浓度在19.92～199.24 μg·mL-1内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9)。苯磺酸氨氯地平与盐酸贝那普利的平均回收率分别为100.3%(n=9)和99.3%(n=9)。结论该法快速、准确,适用于氨氯地平贝那普利胶囊的含量测定。

氨氯地平,苯磺酸；贝那普利,盐酸；色谱法,超高效液相；含量测定

苯磺酸氨氯地平(amlodipine besylate,AB)是第二代长效的双氢吡啶类钙拮抗药,可通过舒张冠状血管和全身血管,增加冠脉血流量降低血压,临床主要用于治疗高血压和心绞痛[1-2]。为了减少靶器官损伤,提高疗效,可将血管紧张肽转换酶抑制药与钙拮抗药联合用药治疗高血压,安全有效,具有良好的耐受性[3-5]。盐酸贝那普利(benazepril hydrochloride,BH)在肝内可水解为贝那普利拉(benazeprilat)。贝那普利拉是一种竞争性的血管紧张肽转换酶抑制药,可降低血管阻力,减少醛甾酮分泌,增高血清肾素活性,还可通过抑制缓激肽降解使血管阻力降低,产生降压作用[6]。复方氨氯地平贝那普利胶囊由诺华制药公司研制,于1995年获美国食品药品管理局(FDA)批准上市,国内尚无该复方制剂上市。开发复方氨氯地平贝那普利胶囊具有良好的临床应用和市场经济价值,建立超高效液相色谱法测定复方胶囊中氨氯地平和盐酸贝那普利的含量,适用于复方氨氯地平贝那普利胶囊的质量控制。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 超高效液相色谱仪(美国Waters公司)；分析柱为ACQUITY BEH C18(100 mm×2.1 mm, 1.7 μm；美国Waters公司)。CP225D型电子分析天平(德国Sartorius公司)；BS224S型电子分析天平(德国Satorius公司)。

1.2 试剂 复方氨氯地平贝那普利胶囊(广东丽峰药业有限公司,规格:氨氯地平2.5 mg/盐酸贝那普利10 mg,批号:1201101,1201102,1201103),苯磺酸氨氯地平、盐酸贝那普利、贝那普利拉对照品(中国食品药品检定研究院,批号:100768-200501,100374-200903, 100771-201001),甲醇(色谱纯,德国默克公司),甲酸(色谱纯,天津科密欧化学试剂有限公司),水(屈臣氏双蒸水)。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液 分别称取苯磺酸氨氯地平对照品约31.6 mg(约相当于氨氯地平25 mg)与盐酸贝那普利对照品约100 mg,精密称定,置于100 mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,得对照品贮备液。精密量取对照品贮备液1.0 mL,置于10 mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,即得(实际配得混合对照溶液浓度为含氨氯地平25.70 μg·mL-1,盐酸贝那普利99.62 μg·mL-1)。取贝那普利拉对照品约2 mg,精密称定,置于10 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,即得。

2.1.2 供试品溶液 取本品胶囊内容物,研细,取适量(氨氯地平2.5 mg,盐酸贝那普利10.0 mg),精密称定,置于100 mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,即得。

2.1.3 系统适用性溶液 按照“2.1.2”项下方法称取胶囊内容物细粉后,加水约40 mL,95℃水浴2 h,放冷至室温,加水稀释至刻度,摇匀,滤过,即得。

2.1.4 阴性对照溶液 按处方组成制备除主药外的阴性样品,按“2.1.2”项下的制备方法处理即得。

2.2 色谱条件 色谱柱为ACQUITY BEH C18柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)；流动相为甲醇∶水∶甲酸=65∶35∶1；流速为0.2 mL·min-1；检测波长为240 nm；柱温为30℃；进样量为2 μL。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性与系统适用性实验 分别取“2.1”项下的供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液和系统适用性溶液,按“2.2”项下色谱条件进样检测,记录色谱图。可见阴性对照对样品测定无干扰,系统适用性溶液所得的色谱图中氨氯地平、盐酸贝那普利与水解产物贝那普利拉的理论板数均＞4 000,分离度符合要求。见图1。

a.贝那普利拉溶液;b.系统适用性溶液;c.混合对照品;d.供试品;e.阴性对照;1.贝那普利拉;2.盐酸贝那普利;3.苯磺酸氨氯地平图1 5种溶液的UPLC色谱图a.benazeprilat solution；b.solution of system suitability；c. mixed reference；d.sample；e.negative control；1.benazeprilat；2. benazepril hydrochloride；3.amlodipine besylateFig.1 UPLC Chromatograms of five kinds of solution

2.3.2 线性关系考察 精密量取对照品贮备液适量,分别加流动相稀释,摇匀,配制成氨氯地平浓度为5.14,12.85,25.70,38.55,51.40 μg·mL-1,盐酸贝那普利浓度为19.92,49.81,99.62,149.43, 199.24 μg·mL-1的系列对照品溶液。在“2.2”项下色谱条件下,分别进样检测,记录色谱图。以对照品质量浓度(C,μg·mL-1)为横坐标,以对照品峰面积(A)为纵坐标,绘制标准曲线,得氨氯地平的回归方程:A= 23 400C-8 499.1,r=0.999 9；盐酸贝那普利的回归方程:A=11 726C-4 595.4,r=0.999 9。结果表明,苯磺酸氨氯地平(按氨氯地平计算)与盐酸贝那普利质量浓度分别在5.14～51.40,19.92～199.24 μg·mL-1范围内峰面积呈良好的线性关系。

2.3.3 精密度实验 取同一供试溶液,连续重复进样6次,记录峰面积。氨氯地平峰面积的RSD为0.09%,盐酸贝那普利峰面积的RSD为0.07%,表明该方法精密度良好。

2.3.4 重复性实验 取同批(批号:1201101)氨氯地平贝那普利胶囊,按“2.1.2”项下方法平行制备6份供试品溶液,依法测定,以外标一点法计算含量；测得氨氯地平和盐酸贝那普利相当于标示量的百分含量分别为101.6%和104.0%,RSD分别为1.88%和2.19%(n=6),表明该方法重复性良好。

2.3.5 稳定性实验 取同一供试品溶液,分别于0, 2,4,6,8 h进样测定。在室温条件下,峰面积无明显变化,氨氯地平和盐酸贝那普利两组分峰面积8 h内的RSD分别为0.19%和0.22%。

2.3.6 加样回收实验 取已知含量的氨氯地平贝那普利胶囊内容物(批号:1201101,含氨氯地平和贝那普利分别为9.01,36.89 mg·g-1),研细,分别精密称取适量(约相当于氨氯地平/贝那普利1/4,1.25/5,1.5/6 mg各3份),分别置100 mL量瓶中,依次加入“2.1.1”项下的混合对照品溶液4,5,6 mL(各3份),按“2.1.1”项下的方法制备低、中、高3个不同浓度的溶液,按“2.2”项下色谱条件进样检测,测定含量,计算氨氯地平和盐酸贝那普利的平均回收率(n=9)分别为100.3%(RSD=1.2%)和99.3%(RSD=1.1%)。见表1。

表1 氨氯地平和盐酸贝那普利回收率实验测定结果Tab.1 Results of recovery experiment of amlodipine and hydrochloride benazepril

2.4 样品测定 取本品3批胶囊内容物研磨成细粉,依法测定,记录峰面积,计算氨氯地平和盐酸贝那普利的含量,结果见表2。

3 讨论

杨爽等[7]报道,采用HPLC法测定本复方片剂的含量,流动相较复杂,需加入氯化钾缓冲液和高氯酸钠,本实验参考文献[8],曾采用甲醇∶水为流动相,结果氨氯地平与盐酸贝那普利分离度达到要求,但峰形较差,且盐酸贝那普利与水解产物贝那普利拉不能达到基线分离,加入甲酸后,峰形得到改善,与贝那普利拉分离度达到要求,经实验最后确定甲醇∶水∶甲酸=65∶35∶1为流动相。

表2 3批样品测定结果Tab.2 Determination results of three batches of samples %

采用UPLC检测,分析时间短且分离度好,经方法学研究表明,本方法简单、准确,能有效控制氨氯地平盐酸贝那普利胶囊的质量。

[1] 马永义.苯磺酸氨氯地平的质量研究[D].长春:吉林大学,2006.

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DOI 10.3870/yydb.2014.04.024

Content Determination in Amlodipine Besylate and Benazepril Hydrochloride Capsules by UPLC

WANG Ya-jing1,DENG Hong1,ZHANG Shu1,HUANG Xue-feng2
(1.Institute of Materia Medica,Guangdong Pharmaceutical University,Guangdong Provincial Key Laboratory of Advanced Drug Delivery,Guangzhou 510006,China;2.Guangdong Lifeng Pharmacy Ltd.,Guangzhou 510931,China)

Objective To establish a method for the determination of the content of benazepril hydrochloride and amlodipine besylate capsules.MethodsUltra performance liquid chromatography(UPLC)was adopted in this study.The analytical column was BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)and the mobile phase was methanol-water-formic acid(65∶35∶1 in volume)at a flow rate of 0.2 mL·minL-1.The ultraviolet(UV)detection wavelength was 240 nm,the column temperature was 30℃,and the injection volume was 2 μL.ResultsAmlodipine besylate could be well separated from Benazepril hydrochloride under the conditions mentioned above.The linear relationship between the concentration and area of chromatographic peak were established in the range of 5.14-51.40 μg·mL-1for amlodipine besylate and in the range of 19.92-199.24 μg·mL-1for benazepril hydrochloride(r=0.999 9).The average recoveries of amlodipine besylate and benazepril hydrochloride were 100.3%and 99.3%(n=9),respectively.ConclusionThe method is simple,specific,accurate and suitable for the determination of the content of amlodipine besylate and benazepril hydrochloride capsules.

Amlodipine,besylate;Benazepril,hydrochloride;Chromatography,ultra performance liquid;Determination

R972.4;R927.2

A

1004-0781(2014)04-0493-03

2013-07-24

2013-10-31

*广东省科技厅企业科技特派员工作站建设项目(2011B090600033)

王亚静(1988-),女,河北石家庄人,在读硕士,主要从事药物制剂及质量分析方面的研究。电话:020-39352507；E-mail：wangyajing04@163.com。

邓红(1968-),女,广东清远人,教授级高级工程师,学士,主要从事药物制剂及质量分析方面的研究。电话: 020-39352507,E-mail：dengh361@sohu.com。