马国平,叶少玲,王琼,朱萱萱

(1.南京中医药大学附属医院药学部,南京 210029；2.南京中医药大学,南京 210029)

清肝泻心汤联合甲巯咪唑对甲状腺功能亢进大鼠激素水平的影响

马国平1,叶少玲2,王琼1,朱萱萱1

(1.南京中医药大学附属医院药学部,南京 210029；2.南京中医药大学,南京 210029)

目的 观察清肝泻心汤联合甲巯咪唑对甲状腺功能亢进(甲亢)模型大鼠激素水平的影响。方法给大鼠灌胃左甲状腺素钠600μg·kg-1,连续3周,制造甲亢模型,观察清肝泻心汤和甲巯咪唑对其血清三碘甲状腺素原氨酸(T3)、游离三碘甲状腺素原氨酸(FT3)、四碘甲状腺素原氨酸(T4)、游离四碘甲状腺素原氨酸(FT4)、促甲状腺素(TSH)和促甲状腺素受体抗体(TRAb)含量的影响。结果清肝泻心汤、甲巯咪唑及二者联合应用均能明显降低甲亢模型大鼠异常增高的进食量、饮水量和体温,降低FT3、FT4和T4水平;二者联合应用对T4的降低作用更显著(P＜0.01),但对TRAb水平没有明显影响(P＞0.05)。结论清肝泻心汤联合应用甲巯咪唑对甲亢模型大鼠甲状腺功能具有良好的改善作用。

清肝泻心汤;甲巯咪唑;甲状腺功能亢进;甲状腺激素

甲状腺功能亢进(甲亢)是由多种原因引起的甲状腺激素分泌过多所致的一种常见内分泌疾病,属中医学“瘿病”范畴。清肝泻心汤是江苏省中医院中医外科专家许芝银教授集数十年临床经验总结出的治疗甲亢心肝火旺证的经验用方,临床上配合甲巯咪唑片治疗。笔者在本实验中采用左甲状腺素钠建立实验性大鼠甲亢模型的基础上,观察清肝泻心汤与甲巯咪唑联合应用对甲亢模型大鼠对甲状腺激素和促甲状腺素受体抗体(thyrotrophin receptor antibody,TRAb)水平的影响,为该经验方的临床推广应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 动物和饲料 雄性SD大鼠,体质量180～220 g,由上海斯莱克实验动物有限公司提供,合格证号: SCXK(沪)2008-0016。全价营养颗粒饲料:由江苏省协同医药生物技术有限公司提供。

1.2 药物及试剂 清肝泻心汤:由江苏省中医院制剂部提供,批号:120603；甲巯咪唑片:上海黄海制药有限责任公司,批号:111003,左甲状腺素钠:德国Merck KGaA公司,批号:141249。血清三碘甲状腺素原氨酸(three iodine thyroxine,T3)、游离三碘甲状腺素原氨酸(free three iodine thyroxine,FT3)、四碘甲状腺素原氨酸(four iodine thyroxine,T4)、游离四碘甲状腺素原氨酸(free four iodine thyroxine,FT4)、促甲状腺素(thyroidstimulating hormone,TSH)放射免疫测定试剂盒:北京华英生物技术研究所,批号:20120902；大鼠TRAb试剂盒,美国R&D公司,批号:20120822。

1.3 实验条件 室温(22±2)℃,相对湿度55%～65%,光照适度,通风洁净良好。

1.4 实验仪器 r-911全自动放射免疫计数仪:中国科技大学实业总公司,FA1004型电子分析天平:上海精科天平厂。TECAN酶标分析仪:奥地利Sunrise公司。

1.6 甲亢大鼠模型的建立 取健康大鼠(正常组除外)每天灌胃给予左甲状腺素钠(600μg·kg-1),连续造模3周[1-2]；各组造模大鼠每周记录基础代谢情况(体质量、肛温、进食量和饮水量)；随机取正常组和模型组大鼠各10只,分离血清,检测血清FT3、FT4、TSH水平,用于评价模型大鼠甲状腺功能的变化情况。

1.7 清肝泻心汤对甲亢模型大鼠甲状腺功能的影响 造模大鼠40只,随机分4组,每组10只。模型组给予等量0.9%氯化钠溶液；清肝泻心汤组给予清肝泻心汤生药20 g·kg-1；甲巯咪唑组给予甲巯咪唑10 mg·kg-1；联合组同时给予清肝泻心汤(相当于生药20 g·kg-1),甲巯咪唑10 mg·kg-1；正常组给予等量0.9%氯化钠溶液。治疗3周(第4～6周),于实验结束时,取血分离血清,检测血清T3、T4、FT3、FT4、TSH水平[3]。观察清肝泻心汤对甲亢模型大鼠甲状腺功能的影响。

2 结果

2.1 5组大鼠体质量、体温和饮水量的变化 结果见表1～3。正常组大鼠精神状况、活动情况、毛色光泽均未见异常,体质量增加、体温、饮水量和进食量均正常；模型组大鼠于造模期间大部分出现活动频繁,易激怒,好斗,毛须竖起,体质量增加缓慢,体温升高,饮水量均增多,与正常组大鼠比较差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05)。

采用清肝泻心汤、甲巯咪唑、清肝泻心汤联合甲巯咪唑干预后大鼠易怒好斗行为缓解,体温下降,饮水量减少。提示清肝泻心汤、甲巯咪唑、清肝泻心汤联合甲巯咪唑可改善大鼠甲亢进体征。

2.2 5组大鼠甲状腺功能比较 见表4。

结果表明,甲亢模型大鼠血清FT3、FT4、T4显著高于正常组大鼠(P＜0.01)；清肝泻心汤组和联合组大鼠给予相应药物治疗后,甲亢模型大鼠血清FT3、FT4和T4水平显著降低(P＜0.01)。

2.3 5组大鼠血清TRAb比较 联合组、清肝泻心汤组、甲巯咪唑组、模型组、正常组大鼠血清TRAb分别为(16.84±7.78),(19.25±9.97),(19.04±7.74), (17.42±6.98),(14.96±11.43)ng·mL-1。结果表明,甲亢模型大鼠血清TRAb水平与正常组比较无明显改变；各给药组大鼠血清TRAb水平与模型组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

表1 5组大鼠不同时间体质量的变化Tab.1 Changes of body w eight of five groups of rats at different time point g,

表1 5组大鼠不同时间体质量的变化Tab.1 Changes of body w eight of five groups of rats at different time point g,

与正常组比较,*1P＜0.01,*3P＜0.05;与模型组比较,*2P＜0.01Compared with the normal group,*1P＜0.01,*3P＜0.05;compared with the model group,*2P＜0.01

组别大鼠/只实验前实验第1周实验第2周实验第3周实验第4周实验第5周实验第6周正常组10 177.0±3.5 200.5±6.0 225.0±8.5 265.5±11.2293.9±30.1 308.0±34.9 329.4±52.5模型组10 177.3±2.6 189.1±6.6*1187.7±7.9*1206.8±16.9*1230.6±14.7*1211.7±11.7*1249.4±17.2*1甲巯咪唑组10 176.8±3.4 199.6±4.7 200.5±8.2*1219.6±17.1*1236.0±25.9 231.0±29.2 270.0±23.0*2清肝泻心汤组10 177.7±2.6 191.8±8.7*3191.5±6.3*1205.0±11.0*1226.0±28.8 229.0±23.9 237.5±38.8联合组10 178.6±3.9 194.1±4.4*3193.2±6.8*1198.6±13.4*1226.5±36.6 229.5±37.3 245.5±23.6

表2 5组大鼠不同时间体温的变化Tab.2 Changes of body tem perature of five groups of rats at d ifferent time point ℃,

表2 5组大鼠不同时间体温的变化Tab.2 Changes of body tem perature of five groups of rats at d ifferent time point ℃,

与正常组比较,*1P＜0.01;与模型组比较,*2P＜0.05Compared with the normal group,*1P＜0.01;compared with the model group,*2P＜0.05

组别大鼠/只实验第1周实验第2周实验第3周实验第4周实验第5周实验第6周正常组10 36.32±0.52 36.32±0.45 36.43±0.33 37.46±0.54 36.42±0.59 37.13±0.49模型组10 36.47±0.55 38.36±0.76*137.55±0.84*138.09±0.25*138.18±0.75*138.63±0.44*1甲巯咪唑组10 36.52±0.56 38.32±0.64*137.60±1.00*138.02±0.30 37.48±0.51*238.24±0.32*2清肝泻心汤组10 36.48±0.63 37.77±0.52*137.70±0.81*137.77±0.24*237.46±0.64*238.13±0.58*2联合组10 36.55±0.58 37.63±0.56*137.53±0.84*137.92±0.20 37.98±0.45 38.11±0.55*2

表3 5组大鼠不同时间饮水量的变化Tab.3 Changes of water intake of five groups of rats at different time point mL,

表3 5组大鼠不同时间饮水量的变化Tab.3 Changes of water intake of five groups of rats at different time point mL,

与正常组比较,*1P＜0.05,*2P＜0.01;与模型组比较,*3P＜0.05Compared with the normal group,*1P＜0.05,*2P＜0.01;compared with the model group,*3P＜0.05

组别大鼠/只实验前实验第1周实验第2周实验第3周实验第4周实验第5周实验第6周正常组10 37.01±0.70 28.44±2.42 24.45±0.78 22.60±1.13 11.68±0.46 13.08±0.66 11.24±0.50模型组10 35.23±5.79 42.88±1.56*137.69±2.97*137.26±3.39*120.82±1.66*125.50±0.54*230.51±2.82*1甲巯咪唑组10 33.08±2.76 43.08±4.12*141.94±3.69*135.28±2.20*118.22±0.49 29.42±1.73 21.29±0.53*3清肝泻心汤组10 32.44±3.38 42.36±2.61*137.83±2.19*134.16±0.18*216.45±1.90 28.05±3.03 21.29±0.48*3联合组10 34.77±2.69 48.49±3.97*141.05±1.73*243.33±6.66*123.53±3.50 28.84±2.48 21.58±0.42*3

表4 5组大鼠的甲状腺功能比较Tab.4 Comparison of thyroid function among five groups of rats

表4 5组大鼠的甲状腺功能比较Tab.4 Comparison of thyroid function among five groups of rats

与正常组比较,*1P＜0.01;与模型组比较,*2P＜0.01;与清肝泻心汤组和甲巯咪唑组比较,*3P＜0.01Compared with the normal group,*1P＜0.01;compared with the model group,*2P＜0.01;compared with clearing liver and purging the heart decoction group and methimazole group,*3P＜0.01

组别大鼠/只FT3FT4(pg·mL-1) TSH/ (μU·mL-1) T3T4(ng·mL-1)正常组10 0.69±0.46 5.01±2.48 3.59±1.81 0.84±0.18 36.55±12.63模型组10 2.00±0.71*114.47±2.46*12.91±1.10 1.92±1.40 106.02±20.58*1甲巯咪唑组10 0.14±0.05*11.27±0.22*22.53±1.32 1.09±0.44 14.53±4.70*2清肝泻心汤组10 0.23±0.13*22.17±1.37*23.57±0.94 0.84±0.56 19.20±5.26*2联合组10 0.24±0.16*21.73±0.96*22.81±1.45 1.01±0.48 11.53±4.58*2*3

3 讨论

甲亢是指甲状腺处于持续高功能状态,合成和释放过多的甲状腺素,促进物质代谢而形成的以高代谢为主症的临床综合征。一般认为本病是以遗传易感为背景,在感染、精神创伤等因素作用下,诱发体液免疫和细胞免疫功能紊乱。目前,对该病的治疗方法包括:抗甲状腺药物治疗、手术治疗及131碘治疗等3种,但均存在一定的不足。中医认为,甲状腺疾病多因情志内伤,肝气郁结,或肝郁化火而引发。其发病机制与机体生理功能失调及体质因素等有一定关系,本病初起多实,病久则由实转虚或虚实夹杂。本虚者以气虚、阴虚为主,标实者多为肝郁火炽、痰凝血瘀。甲亢的病理变化是以气为先,即由气滞、痰凝、血瘀、肝火直到阴虚,这一病理变化涉及肝、心、肾、脾等脏器,所以在治疗上应注重柔肝理气,健脾养血,调整脏腑功能,从而恢复机体的免疫功能,这样才能巩固疗效,标本兼治。

左甲状腺素钠为人工合成药物,其生化、生理性能与甲状腺分泌与内源性T4相同,可在外周转换为T3,然后与细胞核内的T3受体结合发挥其生理功能[4-5]。笔者采用左甲状腺素钠灌胃法成功建立甲亢大鼠模型,其合适剂量为600μg·kg-1,连续3周；维持剂量为300μg·kg-1,连续3周。研究表明,甲亢大鼠出现明显的多饮、多食、体温升高等。清肝泻心汤能明显降低甲亢模型大鼠异常增高的进食量、饮水量和体温,降低甲亢模型大鼠体内FT3、FT4和T4水平,说明清肝泻心汤对外源性甲状腺素的分解代谢或阻断其吸收可能具有一定的作用,具有对抗甲状腺素所致的实验性甲亢的作用。

TRAb是一类多克隆抗体,是具有异质性的特异性免疫球蛋白,由甲状腺B淋巴细胞产生。TRAb主要有两类,一类为甲状腺刺激性抗体,具有类似TSH的作用,可直接与甲状腺细胞膜上的TSH受体结合；另一类即甲状腺刺激阻断型抗体,它与甲状腺细胞膜上的TSH受体结合,从而阻断TSH与受体的结合。Graves病是一种甲状腺激素分泌增多的器官特异性自身免疫病。临床患者的TRAb大多呈现阳性表达。本实验结果表明,给予清肝泻心汤和联合应用甲巯咪唑干预后TRAb的阳性率与模型组比较未见明显差异,这可能与甲状腺素所致的实验性甲亢与器官特异性自身免疫Graves病病因不同有关。

本实验结果表明,甲巯咪唑、清肝泻心汤和二者联合应用均能明显降低甲亢模型大鼠异常增高的进食量、饮水量和体温,降低甲亢模型大鼠体内FT3、FT4和T4水平,清肝泻心汤联合甲巯咪唑效果更显著(P＜0.01),表明中西药联合应用在临床治疗甲亢具有一定的优势。

[1] 叶丽芳,王旭.甲亢康颗粒对甲亢大鼠功能及组织形态学影响[J].南京中医药大学学报,2011,27(5):478-480.

[2] 胡方林,刘仙菊,易法银,等.甲亢方对实验性甲亢大鼠垂体、胸腺和脾脏病理改变的影响[J].中医药导报,2010, 16(4):81-83.

[3] 胡方林,刘仙菊,易法银,等.内外合治对甲亢模型大鼠甲状腺激素及甲状腺病理改变的影响[J].中华中医药学刊,2009,27(3):543-545.

[4] 张子泰,侯英萍,汪静,等.用左旋T4建立大鼠甲状腺功能亢进模型的实验研究[J].西北国防医学杂志,2004,27 (1):34-36.

[5] 邹宏伟,郭晓明.抑甲亢方对甲亢模型大鼠T3、T4水平的影响[J].实用中医内科杂志,2011,25(4):23-24.

DOI 10.3870/yydb.2014.05.003

Effects of Clearing Liver and Purging the Heart Decoction Combined with Methimazole on Hormone Levels in Hyperthyroid Rats

MA Guo-ping1,YE Shao-ling2,WANG Qiong1,ZHU Xuan-xuan1
(1.Department of Pharmacy,Affiliated Hospital of Nanjing University of Chinese Medicine,Nanjing 210029,China;2.Nanjing University of Chinese Medicine,Nanjing 210029,China)

ObjectiveTo investigate the effects of clearing liver and purging the heart decoction(CLPHD)combined with methimazole on hormone levels in hyperthyroid rats.MethodsRats were administered with levothyroxine (600μg·kg-1)for 3 weeks to establish the hyperthyroid model,and the serum contents of T3,FT3,T4,FT4,TSH and TRAb in hyperthyroid rats treated with CLPHD combined with methimazole were detected.ResultsMethimazole,CLPHD,and the combination therapy significantly reduced food intake,water intake and body temperature of the hyperthyroid rats.All treatments reduced levels of FT3,T4and FT4in hyperthyroid rats.Compared with the CLPHD mono-therapy,the combination therapy significantly lowered serum T4in hyperthyroid rats,but not the TRAb level.ConclusionCLPHD combined withmethimazole can obviously improve the function of thyroid gland in hyperthyroid rats.

Clearing liver and purging the heart decoction;Methimazole;Hyperthyroidism;Thyroid hormone

R286;R977.14

A

1004-0781(2014)05-0561-04

2013-06-19

2013-09-06

马国平(1977-),男,江苏高淳人,主管药师,学士,主要从事中药药理研究。电话:(0)13813931039,E-mail:daniewhd1984@yahoo.com.cn。

朱萱萱(1952-),女,江苏南京人,教授,博士生导师,主要从事药理学研究。电话:025-86555797,E-mail:zhuxuanxuan@sina.com。