谭淑君，李春北，李 铭

(1.攀枝花市第二人民医院内分泌科，四川 攀枝花 617068；2.攀枝花市中心医院内分泌科，四川 攀枝花 617067；3.卫生部北京医院内分泌科实验室，北京 100730)

131I治疗前后Graves病患者CXCL10、CCL22水平表达变化的研究

谭淑君1，李春北2，李 铭3

(1.攀枝花市第二人民医院内分泌科，四川 攀枝花 617068；2.攀枝花市中心医院内分泌科，四川 攀枝花 617067；3.卫生部北京医院内分泌科实验室，北京 100730)

目的观察131I治疗前后Graves病患者CXCL10和CCL22水平表达的变化，为Graves病的临床治疗提供新的思路。方法收集内分泌科2012年6月至2013年6月收治的Graves病患者46例(Graves病组)，另取同期我院体检中心检查的健康者40例作为对照(对照组)。CXCL10和CCL22表达的测定使用ELISA法，Th1和Th2细胞比例使用流式细胞仪检测。结果对照组CXCL10和CCL22的表达水平分别为(16.8±6.3)ng/L和(150.4±22.6)ng/L，显著低于Graves病组治疗前的(62.4±13.2)ng/L和(161.3±25.4)ng/L(P＜0.05，P＜0.01)，131I治疗后CXCL10和CCL22的表达水平均显著减低(P＜0.05，P＜0.01)，但CXCL10仍高于对照组(P＜0.05)，而CCL22与对照组之间差异无统计学意义(P＞0.05)。两组之间CXCL10/CCL22比值差异也有统计学意义(P＜0.05)。正常对照组Th1和Th2细胞比例分别为(1.04±0.41)%和(2.28±0.67)%，显著低于Graves病组治疗前的(8.16±1.62)%和(2.82±0.73)%(P＜0.05，P＜0.01)，131I治疗后Th1和Th2细胞比例均出现了显著的减低(P＜0.05，P＜0.01)，但Th1细胞仍高于对照组(P＜0.05)，而Th2细胞与对照组之间差异无统计学意义(P＞0.05)。两组之间Th1/Th2比值差异也有统计学意义(P＜0.05)。结论Graves病患者中存在CXCL10和CCL22表达水平的升高，131I治疗后可降低CXCL10和CCL22表达水平，调节Th1/Th2细胞的失衡，CXCL10和CCL22因子的检测有可能作为131I治疗反应性的一个指标。

Graves病；CXCL10；CCL22；131I治疗

Graves病(Graves'disease，GD)是一种伴甲状腺激素(TH)分泌增多的器官特异性自身免疫疾病，表现为甲状腺肿大，可放大至两倍或更多，甲状腺的功能也变得过度活跃，产生心跳加快、肌肉无力、睡眠不安、烦躁等甲亢症状[1]。放射性131I治疗是Graves病的一种常见治疗方法，进入血中的131I积聚在甲状腺，释放的β和γ辐射对甲状腺滤泡上皮细胞产生破坏作用，使甲状腺体积减小，甲状腺功能恢复正常，而起到治疗效果[2]。CXCL10和CCL22是新发现的与Th1和Th2细胞激活、局部聚集的趋化调节因子[3-4]，Th1和Th2细胞平衡的紊乱在Graves病发生、发展中的作用已被大多数实验所证实，因此本研究观察了131I治疗前后Graves病患者CXCL10和CCL22水平表达的变化，为131I治疗后临床治疗的判断提供新的思路。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集内分泌科2012年6月至2013年6月收治的Graves病患者46例，其中男性16例，女性30例；年龄20～68岁，平均(44.7±12.5)岁。Graves病的诊断参照2008年《中国甲状腺疾病诊治指南》中的标准[5]。排除标准：以前使用过药物等其他方法治疗的患者；浸润性突眼患者；患有严重心、肝、肺等重要脏器功能不全；单发结节患者；恶性肿瘤；妊娠、哺乳期患者；其他自身免疫性疾病。另取同期我院体检中心检查的健康者40例作为对照，其中男性14例，女性26例；年龄21～70岁，平均(43.8±12.4)岁。两组患者在性别、年龄等一般临床资料方面比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。131I剂量(uCi)= 70～100 uCi×甲状腺重量(g)/甲状腺最高吸131I率。

1.2 试剂和仪器 CXCL10和CCL22检测试剂盒购自中生北控生物科技股份有限公司，FITC-CD4、PE-IFN-γ、APC-IL-4流式抗体以及相应的同型对照为美国RD公司产品，淋巴细胞分离液购自天津灏洋生物制品科技有限责任公司，全自动生化分析仪为日立HICTHI-7080；FACSC alibur流式细胞仪为美国B-D公司产品。

1.3 血清CXCL10和CCL22表达的测定 取所有受试者外周静脉血，1 500×g离心15 min，分离上清待测。血清CXCL10和CCL22表达的测定使用ELISA法，严格按照试剂盒说明书操作，使用标准品绘制标准曲线，然后对照标准曲线计算CXCL10和CCL22的表达水平。

1.4 Th1和Th2细胞的流式细胞仪检测 取患者外周静脉血，淋巴细胞的分离使用Ficoll分层液利用密度梯度离心分离法，Ficoll分层液加入到血液中，1 500×g离心20 min，血浆层和分离液交界处即为单个核细胞层，吸出单个核细胞层，调整细胞浓度为106个细胞/ml，按照试剂盒说明书加入。FITC-CD4、PE-IFN-γ、APC-IL-4流式抗体以及相应的同型对照，避光染色30 min，同型对照各个通道调零，前向和侧向散色光设门取出细胞碎片，FL1和FL2双通道设门圈住CD4和IFN-γ双阳性的Th1细胞，FL1和FL3双通道设门圈住CD4和IL-4双阳性的Th2细胞。

1.5 统计学方法 应用SPSS12.0统计软件处理数据，连续性资料以均数±标准差()表示，两样本均数比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1131I治疗前后Graves病患者 CXCL10、CCL22表达水平的变化 正常对照组CXCL10和CCL22的表达水平显著低于Graves病组治疗前(P＜0.05，P＜0.01)，131I治疗后CXCL10和CCL22的表达水平均显著减低(P＜0.05，P＜0.01)，但CXCL10仍高于对照组(P＜0.05)，而CCL22与对照组之间差异无统计学意义(P＞0.05)。CXCL10/CCL22比值在两组之间差异有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 两组CXCL10、CCL22表达水平的比较()

表1 两组CXCL10、CCL22表达水平的比较()

注：与对照组比较，aP＜0.05；bP＜0.01；与治疗前比较，cP＜0.05，dP＜0.01。

对照组Graves病组治疗前治疗后40 46 16.8±6.3150.4±22.60.12±0.03 161.3±25.4a152.6±24.4c62.4±13.2b25.7±8.5ad0.36±0.08b0.16±0.04ad

2.2131I治疗前后Graves病患者Th1和Th2细胞比例的变化 正常对照组Th1和Th2细胞比例显著低于Graves病组治疗前(P＜0.05，P＜0.01)，131I治疗后Th1和Th2细胞比例均显著减低(P＜0.05，P＜0.01)，但Th1细胞仍高于对照组(P＜0.05)，而Th2细胞与对照组之间差异无统计学意义(P＞0.05)。Th1/Th2比值在三组之间差异有统计学意义(P＜0.05)，见表2和图1。

表2 两组Th1和Th2细胞比例的比较()

表2 两组Th1和Th2细胞比例的比较()

注：与对照组比较，aP＜0.05，bP＜0.01；与治疗前比较，cP＜0.05，dP＜0.01。

对照组Graves病组治疗前治疗后40 46 1.04±0.412.28±0.670.42±0.07 8.16±1.62b2.53±0.84bd2.82±0.73a2.32±0.74c2.81±0.26b1.06±0.14bd

图1 Th1和Th2细胞的流式细胞仪检测

3 讨论

Graves病的发病原因比较复杂，甲状腺弥漫性肿大，滤泡细胞增生，并有淋巴细胞浸润是其基本的病理特点，机体免疫细胞产生针对促甲状腺激素(TSH)受体的甲状腺刺激抗体，诱导了甲状腺功能亢进的产生[6]。放射性碘131I治疗Graves病的疗效较为确切，其临床有效率可以到达90%以上，一般患者在3～4个月后甲状腺功能可恢复正常，但其主要的不利影响就是远期甲状腺功能低下的发生，一般一年后甲减发生率变动在5%～10%，以后逐年增加，10年后可达50%以上，甚至有达到80%的报道[7]。甲减发生后虽然可用甲状腺激素替代治疗，但长期的服药必然会影响患者的正常生活、工作，因此选择131I治疗就要首先权衡甲亢与甲减的利弊关系。

CXCL10属于ELR-CXC亚家族趋化因子，与其趋化因子(趋序)受体3结合后激活G蛋白发挥其功能，可以趋化Th1辅助细胞的局部聚集，已有研究显示CXCL10可由甲状腺细胞分泌。本研究也观察到了Graves病患者CXCL10和Th1细胞比例显著高于健康对照组，升高的CXCL10可以激活并募集Th1细胞，Th1细胞又可以分泌IFN-γ和IL-12等细胞因子参与到细胞免疫中来[8]。131I治疗1个月后检测发现CXCL10和Th1细胞出现了显著的减低，这可能是131I治疗起效的一个可能机制。研究显示机体内存在着Th1/Th2细胞的平衡，Th1细胞增加机会诱发Th2细胞升高，来抗衡Th1细胞的免疫增强效应[9]，CCL22就是一个Th2细胞的刺激和招募因子，本研究也观察到了CCL22和Th2细胞的反应性升高，但升高的CCL22和Th2细胞并没有拮抗Th1细胞的作用，反应在CXCL10/CCL22比值和Th1/Th2比值仍然高于对照组。上述结果说明了131I治疗是通过调节Th1/Th2细胞的平衡来发挥作用的。

综上所述，本研究显示Graves病患者中存在CXCL10和CCL22表达水平的升高，131I治疗后可降低CXCL10和CCL22表达水平，调节Th1/Th2细胞的失衡，CXCL10和CCL22因子的检测有可能作为131I治疗反应性的一个指标，同时也可以为Graves病的治疗提供一个新思路。

[1]Orsini F,Traino AC,Grosso M,et al.Personalization of radioiodine treatment for Graves'disease:a prospective,randomized study with a novel method for calculating the optimal131I-iodide activity based on target reduction of thyroid mass[J].Q J Nucl Med Mol Imaging, 2012,56(6):496-502.

[2]刘少正,张 青.Graves甲亢131I治疗后甲状腺功能减退的因子分析[J].江西医药,2013,48(1):85-89.

[3]李卫鹏,申 勇,胡永全,等.血清CXCL10在131I治疗Graves病中的测定意义[J].放射免疫学杂志,2013,26(3):304-306.

[4] Santulli-Marotto S,Fisher J,Petley T,et al.Surrogate antibodies that specifically bind and neutralize CCL17 but not CCL22[J]. MonoclonAntib Immunodiagn Immunother,2013,32(3):162-171.

[5]李亚范,赵 蕾,韦智晓,等.影响131I治疗Graves病疗效的多因素分析[J].广西医科大学学报,2012,34(6):702-704.

[6]Lewis A,Atkinson B,Bell P,et al.Outcome of131I therapy in hyperthyroidism using a 550MBq fixed dose regimen[J].Ulster Med J, 2013,82(2):85-88.

[7]马学芹,于世鹏.初发Graves病患者131I治疗前后IL-23/Th17轴相关因子水平的变化及意义[J].中国免疫学杂志,2013,7(29):733-735.

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Changes of CXCL10 and CCL22 in patients with Graves'disease after radioactive iodine therapy.

TAN Shu-jun1,LI Chun-bei2,LI Ming3.
1.Department of Endocrinology,the Second People's Hospital of Panzhihua,Panzhihua 617068, Sichuan,CHINA;2.Department of Endocrinology,Panzhihua Central Hospital of Sichuan Province,Panzhihua 617067, Sichuan,CHINA;3.Laboratory of Endocrinology,Beijing Hospital,Beijing 100730,CHINA

ObjectiveTo detect the changes of CXCL10 and CCL22 in patients with Graves'disease(GD) after radioactive iodine therapy.MethodsForty-six patients with GD were enrolled into our study(GD group).Another 40 healthy people were used as normal controls(control group).CXCL10 and CCL22 were detected by ELIAS.Th1 and Th2 cells was detected by flow cytometry.ResultsThe expression levels of CXCL10 and CCL22 was(16.8±6.3)ng/L and(150.4±22.6)ng/L in control group,(62.4±13.2)ng/L and(161.3±25.4)ng/L in GD group (P＜0.05,P＜0.01).After131I therapy,the expression levels of CXCL10 and CCL22 was significantly reduced(P＜0.05, P＜0.01),but CXCL10 was still higher than that in control group(P＜0.05).There were also significant differences of CXCL10/CCL22 ratio between the two groups(P＜0.05).The ratio of Th1 and Th2 cells were(1.04±0.41)%and (2.28±0.67)%in control group,which was significantly lower than(8.16±1.62)%and(2.82±0.73)%in GD group (P＜0.05,P＜0.01).After131I therapy,the ratio of Th1 and Th2 cells were significantly reduced(P＜0.05,P＜0.01),but the ratio of Th1 cells were still higher than that in control group(P＜0.05).There were also significant differences of Th1/Th2 ratio between the two groups(P＜0.05).Conclusion Increased expression of CXCL10 and CCL22 is found in Graves'disease.131I therapy can reduce the expression levels of CXCL10 and CCL22,which regulates the imbalance of Th1/Th2.Detection of CXCL10 and CCL22 may be used as the indicator of response to131I treatment.

Graves'disease;CXCL10;CCL22;131I therapy

R593

A

1003—6350（2014）14—2102—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.14.0814

2014-01-11)

谭淑君。E-mail：tashjus@163.com