黄 昕，吴云涛，冉龙艳，成元华

(1.贵州电力职工医院病理科，贵州 贵阳 550002；2.贵州电力职工医院信息中心，贵州 贵阳 550002；3.贵阳医学院病理学教研室，贵州 贵阳 550004)

·临床病理·

P27KIP1、P21WAF1、Bax在胃肠道间质瘤中的表达及临床意义

黄 昕1，吴云涛2，冉龙艳1，成元华3

(1.贵州电力职工医院病理科，贵州 贵阳 550002；2.贵州电力职工医院信息中心，贵州 贵阳 550002；3.贵阳医学院病理学教研室，贵州 贵阳 550004)

目的探讨P27KIP1、P21WAF1和Bax在胃肠道间质瘤中的表达及其与临床生物学行为的相关性。方法采用免疫组化法检测P27KIP1、P21WAF1和Bax在胃肠道间质瘤中的阳性表达情况，并在良性组、潜在恶性组、恶性病例组之间进行比较。结果55例胃肠道间质瘤中，P27KIP1、P21WAF1和Bax的阳性表达率分别为36.3%、54.5%、60%。P21WAF1、Bax在良性组的表达分别为21.4%、28.6%，而在潜在恶性组、恶性组明显增高。P27KIP1在良性组的表达率为64.3%，明显高于潜在恶性组、恶性组(21.4%、29.6%)。P27KIP1、P21WAF1和Bax三者在潜在恶性组、恶性组的表达与良性组比较差异有统计学意义，而潜在恶性组与恶性组之间差异无统计学意义。P27KIP1、P21WAF1和Bax的表达与胃肠道间质瘤患者的性别、年龄、部位、肿瘤大小、有无坏死、组织学分型无关，而与其恶性潜能分级相关。结论P27KIP1的低表达、P21WAF1和Bax的高表达与胃肠道间质瘤临床恶性潜能密切相关。

胃肠道间质瘤；P27KIP1；P21WAF1；Bax；免疫组织化学

胃肠道间质瘤(Gastrointestinal stromal tumor，GIST)是一种胃肠道最常见的间叶性肿瘤，典型的免疫组化为KIT酪氨酸激酶受体阳性。但从临床表现而言，从良性，小至中等大小，到明确的肉瘤，其生物学行为难以准确预测，因此，寻找能判断GIST生物学行为的客观指标仍然是临床关注以及病理研究的热点。本研究通过检测P27KIP1、P21WAF1、Bax在GIST中的表达，以求探讨其与临床病理特征及生物学行为的关系。

1 材料与方法

1.1 材料 整理贵阳医学院附院1995-2006年间术后诊断为胃肠道间叶源性肿瘤的病例，经CD117、CD34、Desmin、SMA、S-100蛋白筛选，结合组织形态学特点，从中确定GIST 55例，其中男性29例，女性26例，中位年龄54.8岁(24～77岁)；病变部位：食管1例，胃23例，小肠10例，结肠6例，直肠8例，盆腔2例，腹壁1例，腹膜后4例。按照Emory等[1]提出的标准将GIST进行分级，其中良性14例，潜在恶性14例，恶性27例。

1.2 检测方法 (1)取上述存档的石蜡包埋组织块，3µm连续切片，常规HE染色和免疫组化染色。(2)检测P27KIP1、P21WAF1和Bax蛋白采用免疫组织化学—SP法。即用型鼠抗人P27KIP1单克隆抗体(克隆号：ZM-0340)、鼠抗人P21WAF1单克隆抗体(克隆号：ZM-0206)、鼠抗人 Bax单克隆抗体(克隆号ZM-0300)；即用型SP免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒，以上试剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。(3)对照设立。用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作阴性对照。P27KIP1阳性对照为肺鳞癌上皮、P21WAF1阳性对照为乳腺浸润型导管癌腺上皮；Bax阳性对照为胃腺癌上皮。

1.3 结果判断 阳性定位为胞核及胞质出现棕黄色颗粒，且着染细胞数＞10%判断为阳性，P27KIP1和P21WAF1阳性均定位为细胞核，Bax定位为细胞质。

1.4 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件进行数据分析，计数资料两样本率比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结 果

55例GIST组织中，P27KIP1、P21WAF1和Bax的阳性表达率分别为36.3%、54.5%、60%，与临床病理参数的关系见表1。通过χ2检验，不同性别、不同年龄、不同部位、组织学分型、有无坏死之间、肿瘤大小之间，P27KIP1、P21WAF1和Bax的表达差异无统计学意义。良性与潜在恶性之间、良性与恶性之间的阳性表达率差异有统计学意义(P＜0.05)，潜在恶性与恶性之间的阳性表达率差异无统计学意义(P＞0.05)。

表1 P27KIP1、P21WAF1和Bax在胃肠道间质瘤中的阳性表达[例(%)]

3 讨论

P27KIP1通常被认为是一种抑癌基因，具有诱导分化、促进凋亡和抑制增殖的作用。近年研究发现，P27KIP1作为抑癌基因的作用并不表现为基因的缺失或突变，而是以蛋白表达水平的变化起作用，其在蛋白表达水平及活性的改变上与肿瘤形成有关。冯爱强等[2]采用半定量逆转录聚合酶链方法检测了乳腺癌组织得出结论P27KIP1的阳性率为51.9%，其表达水平与组织学分级、淋巴转移程度呈负相关。本实验发现：P27KIP1的表达随着恶性程度的增加，P27KIP1蛋白表达明显降低，由64.3%降为21.4%，36.3%，良性组与潜在恶性组、恶性组之间阳性表达差异有统计学意义。结果证实P27KIP1蛋白的低表达提示GIST恶性潜能的增加，应用免疫组化技术测定GIST中P27KIP1蛋白的表达情况，可作为判断肿瘤的恶性程度的参考指标。

P21WAF1作为肿瘤抑制基因，在肿瘤的发生发展中起重要作用。其与多种肿瘤的发生、发展及预后有关，但P21WAF1的表达在不同组织表达有所差异。李蓉等[3]报道P21在非萎缩胃炎、萎缩胃炎、疣状胃炎及胃癌组织的表达分别为0、22.5%、35%、60%，金建云等[4]报道结直肠癌中正常、癌前、癌旁、癌分别为23.43%、21.78%、26.91%和12.82%。本实验发现：P21WAF1表达与GIST患者性别、年龄、肿瘤部位、组织学分型、大小、有无坏死无关，随着恶性程度的增加，P21WAF1蛋白表达增高，由良性的21.4%增为潜在恶性的64.2%，恶性的66.7%。在良性和潜在恶性或恶性GIST之间P21WAF1的阳性表达率差异有统计学意义，P21WAF1表达高可能有助于遏制GIST中肿瘤细胞的无限增生。因此，检测GIST组织中P21WAF1表达水平有助于了解GIST的生物学行为。

Bax作为促细胞凋亡基因蛋白，既可以直接影响线粒体功能，又可以间接通过降低某些化疗药物对细胞凋亡的耐受力，而诱导细胞凋亡。卢明书等[5]报道胃癌组织中高分化腺癌的细胞凋亡指数显著高于低分化腺癌和黏液癌，胃癌组织中Bax表达为35.1%，明显低于非癌组织。本研究表明，Bax的表达与胃肠道间质瘤患者的性别、年龄、部位、肿瘤大小、有无坏死、组织学分型无关，随着恶性程度的增加，表达增高，其表达率在良性组和潜在恶性、恶性组之间差异有统计学意义，这对我们判断恶性潜能有辅助意义，因此检测GIST组织中Bax表达水平有助于了解GIST的生物学行为。

通过本研究，我们发现随着胃肠道间质瘤恶性潜能的增加，P27KIP1的表达会明显减少、P21WAF1和Bax的表达会显著增加，而且其蛋白水平的改变与GIST患者的性别、年龄、部位、肿瘤大小、有无坏死、组织学分型无相关性，这对日常临床病理诊断工作判断其生物学行为、评估预后有较好的提示作用，并且对实验室而言，免疫组织化学染色方法容易开展，临床病理诊断中可通过免疫组化测定其表达情况，作为判断恶性潜能的辅助指标。

[1]Emory TS,Sobin LH,Lukes L,et al.Prognosis of gastrointestinal smooth muscle(stromal)tumors:dependence on anatomic site[J]. Am J Surg Pathol,1999,23(1):82-87

[2]冯爱强,李蕾蕾.SKP2和P27KIP1在乳腺癌组织中的表达及其相关性的研究[J].天津医药,2012,40(5):424-426.

[3]李 蓉,赵梦云,张永红,等.不同类型的胃炎和胃癌组织中p21、p16蛋白的表达及临床意义[J].海南医学,2013,24(20):2968-2969.

[4]金建云,王海波.Cyclin D1、P21WAF1在结直肠癌中的表达及其临床意义[J].山东医药,2011,51(49):82-83

[5]卢书明,张竹青,潘 科,等.胃癌组织p57kip2和Bax蛋白的表达及其凋亡的关系[J].临床肿瘤学杂志,2011,16(12):1084-1087.

Expression and significance of P27KIP1,P21WAF1,Bax in gastrointestinal stromal tumors.

HUANG Xin1,WU Yun-tao2,RAN Long-yan1,CHEN Yuan-hua3.
1.Department of Pathology,Guizhou Hospital of Electricity Power,Guizhou 550002,Guiyang,CHINA;2.Information Center,Guizhou Hospital of Electricity Power,Guizhou 550002,Guiyang, CHINA;3.Department of Pathology,Guiyang Medical School,Guizhou 550004,Guiyang,CHINA

ObjectiveTo investigate the correlation between biological behavior and expression of P27KIP1, P21WAF1and Bax in gastrointestinal stromal tumors.MethodsImmunohistochemical method was used to detect P27KIP1,P21WAF1and Bax expression in 55 cases of GIST,which were compared among benign GIST,potential malignant GIST,and malignant GIST.ResultsIn 55 cases of GIST,the positive expression rates of P27KIP1,P21WAF1and Bax were 36.3%,54.5%,60%.The expression rate of P21WAF1and Bax were 21.4%,28.6%in benign GIST,which were significantly increased in potential malignant GIST and malignant GIST.The expression rate of P27KIP1in benign GIST(64.3%)was significantly higher than that in potential malignant GIST(21.4%)and malignant GIST(29.6%). The expression rate of P27KIP1,P21WAF1and Bax showed statistically significant difference between benign GIST and potential malignant GIST,malignant GIST,but showed no statistically significant difference between potential malignant GIST and malignant GIST.The expressions of P27KIP1,P21WAF1and Bax showed no correlation with age,sex,location, size,necrosis and histological scheme,but they were related with the malignant progression.ConclusionThe low expression of P27KIP1,the high expression of P21WAF1and Bax are closely related to clinical malignant potential of GIST.

Gastrointestinal stromal tumors;P27KIP1;P21WAF1;Bax;Immunohistochemistry

R735

A

1003—6350（2014）24—3717—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.24.1448

2014-05-14)

黄 昕。E-mail：380666970@qq.com