克拉霉素颗粒溶出度测定

2014-05-03王国金王维剑

中国药业 2014年5期

杜亮，王国金，王维剑

（1.中国人民解放军济南军区联勤部疾病预防控制中心，山东济南 250014；2.山东省食品药品检验所，山东济南 250101）

克拉霉素属大环内酯类抗生素，制剂有片剂、胶囊剂及颗粒剂，其原料与制剂均收载于2010年版《中国药典（二部）》[1-2]。2010年版《中国药典(二部)》中克拉霉素颗粒的溶出度采用硫酸显色法检测，该方法专属性差、操作烦琐、易腐蚀仪器设备。笔者采用高效液相色谱（HPLC）法替代硫酸显色法，建立了一种快速、简便、准确的克拉霉素颗粒溶出度测定方法。现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪；RC-806型溶出度测定仪器；BP211D型电子天平。克拉霉素对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号为130558-200501，含量为97.5%；克拉霉素颗粒样品来源见表1；乙腈为色谱纯，水为蒸馏水。

表1 克拉霉素颗粒样品来源

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent Zorbax-C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾 9.11 g，加水溶解并稀释至1 000 mL，加三乙胺 2 mL，用磷酸调节 pH 至 5.5）-乙腈（60∶40）；检测波长：210 nm；流速：1.0 mL /min；柱温：45 ℃ ；进样量：40 μL。

2.2 溶液制备

取克拉霉素颗粒样品，照溶出度测定法，以醋酸盐缓冲液（取0.1 mol/L醋酸钠溶液，用冰醋酸调节 pH 至 5.0）900 mL为溶出介质，以50 r/min的速度离心30 min，取溶液适量，滤过，精密量取续滤液适量，用溶出介质稀释成每1 mL中约含55 μg的溶液，即得供试品溶液；取克拉霉素对照品适量，精密称定，加少量乙腈溶解并用溶出介质稀释成每1 mL中约含55 μg的溶液，即得对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性考察：将克拉霉素颗粒的辅料按处方配比混合，取处方量（相当于1袋的辅料）的混合辅料，用900 mL溶出介质超声30 min，滤过，取续滤液按供试品溶液制备方法稀释，得辅料供试液。取辅料供试液、溶出介质、对照品溶液、供试品溶液分别用HPLC法进样测定。结果表明，辅料与溶出介质对溶出度测定均无干扰。见图1。

检测限与定量限试验：用溶出介质分别配制质量浓度为0.13，0.26，0.39，0.77，1.3，2.6 μg /mL 的对照品溶液，分别依法进样测定，进样量为 40 μL。结果检测限进样质量浓度为 0.26 μg /mL，定量限进样质量浓度为 0.77 μg /mL。

线性关系考察：取克拉霉素对照品约25 mg，加少量乙腈溶解并用溶出介质稀释成质量浓度为1 μg/mL的溶液，作为对照品贮备溶液。精密量取上述对照品贮备溶液 2，3，4，5，6，7，8，9 mL分别置100 mL容量瓶中，用溶出介质稀释至刻度，依法进样测定，得线性方程为 A＝1.998 7 C+0.152 1，r＝0.999 3(n＝8)。结果表明，克拉霉素质量浓度在 20.60～92.68 μg/mL 范围内与峰面积呈良好线性关系。

图1 高效液相色谱图

回收率试验：将克拉霉素颗粒辅料按处方配比混合，取处方量（相当于 1袋的辅料）的混合辅料 9份，分别加入标示量100%，80%，50%的克拉霉素对照品各3份，按拟订方法分别测定；另取克拉霉素对照品，同法测定。结果平均回收率为99.30%，RSD ＝0.91%。

稳定性试验：取供试品溶液，分别于 0，1，2，4，6，8，12 h 时进样测定，考察溶液的稳定性。结果的 RSD为0.70%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

检测方法耐用性试验：取对照品溶液，分别用3台不同的高效液相色谱仪与3根不同的色谱柱，按拟订色谱条件分别进样测定，考察方法的系统适应性，结果3套系统均能满足检测的需要，表明该方法耐用性良好。

2.4 溶出均一性曲线测定

取本品4个不同规格样品各1批，依法操作，分别于5，10，15，20，30，45，60 min时取样测定，计算每个时间点的平均累计溶出量，绘制溶出曲线，见图2。结果表明，各批样品溶出均一性均较好。

2.5 样品溶出度测定

取克拉霉素颗粒4个规格共10批样品，照拟订方法测定，结果见表2。结果表明，10批样品在30 min的溶出度均大于标示量的80%。

3 讨论

检测方法选择：中国药典中收载了克拉霉素颗粒剂溶出度检测方法，采用硫酸显色法，但该方法专属性较差，且操作复杂，具有一定的危险性（硫酸腐蚀），因此本研究建立了专属性比硫酸显色法更强的HPLC法，且方法简单、快速、准确，适用于克拉霉素颗粒的溶出度测定。

溶出介质选择：中国药典的克拉霉素颗粒、胶囊及片剂以及美国药典(2008年版2 692页中克拉霉素片剂的溶出介质均为醋酸盐缓冲液（pH＝5.0）[3]，本研究参考上述两国药典，采用醋酸盐缓冲液（pH＝5.0）作为克拉霉素颗粒剂的溶出介质。

溶出转速与取样时间选择：首先采用桨法的最低转速（50 r/min）进行溶出曲线考察。取5个不同厂家产品各1批，50 r/min，依法操作，分别于 5，10，15，20，30，45，60 min 时取样测定，计算每个时间点的平均累计溶出量，绘制溶出曲线。50 r/min，15 min时，克拉霉素已基本达到溶出平台。参照溶出度转速选择时首选低转速的原则，本研究选择了50 r/min，30 min时测定溶出度，不再考虑更高的转速。