林勤，余之焕

（1.湖北省黄石市中心医院普爱病区，湖北 黄石 435000； 2.湖北省黄石市中医医院，湖北 黄石 435000）

复方五倍子熏洗液（鄂药制字Z20070439）是我院老中医根 据几十年临床经验拟订的协定处方，对痔疮的治疗及其各种症状缓解效果较好。为保证临床疗效，根据生产工艺，对复方五倍子熏洗液的质量进行控制。以没食子酸为对照品，按2010年版《中国药典（一部）》附录中薄层色谱法试验，对复方五倍子熏洗液进行定性鉴别，采用高效液相色谱法测定五倍子中主要化学成分鞣质的水解产物没食子酸的含量。现报道如下。

1 仪器与试药

LC－10A型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；SPD－10A型紫外检测器（日本岛津公司）；色谱柱为HypersilBDSC18柱（250mm×4.6mm，5μm）；Sartorius BT 25S型电子天平（北京赛多利斯仪器有限公司）。五倍子、桑寄生、扑硝、莲房、枯凡均购自湖北省黄石市药材公司；没食子酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号为110831－200302）；硅胶GF254薄层G板（青岛海洋化工厂）；自制复方五倍子熏洗液 3批（批号分别为 20100516，20100522，20100525）；甲醇、盐酸、三氯甲烷、甲酸乙酯、甲酸等试剂均为化学纯，纯化水自制。

2 方法与结果

2.1 处方及制备工艺

处方：五倍子 30 g，桑寄生 30 g，扑硝 30 g，莲房 30 g，枯凡 9 g。

制备：将处方量五倍子、桑寄生、扑硝、莲房、枯凡分别粉碎，过四号筛，加纯化水适量，浸泡30 min后，文火煎煮20 min，过滤；药渣再加纯化水适量，用文火煎煮15min，过滤，合并滤液，浓缩，调节总量至1 000mL，即得复方五倍子熏洗液。

2.2 定性鉴别

取复方五倍子熏洗液适量，水浴蒸干，加甲醇5 mL，超声处理15min，滤过，滤液中加入4mol／L盐酸适量，继续水浴加热水解3.5 h，放冷，作为供试品溶液。另取缺五倍子阴性样品适量，同法制成阴性对照品溶液。取没食子酸对照品适量，加甲醇制成每1mL含1mg的没食子酸溶液，作为对照品溶液。按2010年版《中国药典 （一部 ）》附录薄层色谱法试验［1］，吸取上述3种溶液各2μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷－甲酸乙酯－甲酸（5 ∶5 ∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视。结果在供试品溶液与对照品溶液色谱相应位置显相同颜色的斑点，阴性无干扰，见图1。

图1 薄层色谱图

2.3 没食子酸含量测定

2.3.1 溶液制备

精密称取没食子酸对照品100mg，置100mL棕色容量瓶中，加50%甲醇溶解，制成1 g／L没食子酸对照品贮备液。精密量取复方五倍子熏洗液5mL，置100mL烧杯中，水浴蒸干；加入4mol／L盐酸适量，继续水浴，加热水解3.5 h，放冷，定量转移至100mL容量瓶中，用4 mol／L盐酸调节至刻度，滤过；精密量取续滤液2mL，置25mL棕色容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。按复方五倍子熏洗液制备方法制备不含五倍子的熏洗液，再按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3.2 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：甲醇－0.1% 磷酸溶液（15 ∶85）；柱温：30 ℃ ；流速：1.0mL ／min；检测波长：273 nm；进样最：20μL。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，结果对照品溶液和供试品溶液在保留时间为8.198 min处有很好的吸收峰，阴性对照品溶液无干扰，见图2，分离度大于1.5，理论板数按没食子酸峰计算应不低于3500。

2.3.3 方法学考察

线性关系考察：分别精密量取没食子酸对照品贮备液适量，分别置25 mL棕色容量瓶中，得1～5号对照品溶液，各加入50%甲醇至刻度，摇匀，得质量浓度为20，40，60，80，100 μg ／mL 的系列对照品溶液，注入高效液相色谱仪，记录峰面积。以峰面积（Y）为纵坐标、质量浓度（X）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程Y＝142.96X＋0.0824，r＝0.9996（n＝5）。结果表明，没食子酸进样量在 20.0～100.0μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

阴性干扰试验：分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各20μL，按拟订色谱条件进样测定。结果阴性对照品溶液在与没食子酸对照品溶液相同保留时间处未出现干扰色谱峰，故本法适合复方五倍子熏洗液中的没食子酸的含量测定，见图2。

图2 高效液相色谱图

精密度试验：精密量取没食子酸对照品贮备液适量，用流动相稀释成质量浓度为60μg／mL的溶液，取20μL注入高效液相色谱仪，记录峰面积，连续测定6次。结果的RSD为0.63%（n＝6），表明方法精密度良好。

稳定性试验：精密量取同一供试品溶液，放置，分别于0，1，2，4，6，8 h时依法测定。结果的RSD为 1.13% （n＝6），表明供试品溶液在8 h内稳定。

重复性试验：精密量取同一批（批号为20100516）复方五倍子熏洗液6份，分别按供试品溶液制备方法制备溶液，依法连续进样测定。结果的RSD为1.57%（n＝6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：精密量取同一批（批号为20100516）复方五倍子熏洗液9份，每份2.5 mL，分别置100 mL烧杯中，分成3组，每组3份；精密称取没食子酸对照品60，75，90mg各3份，分别加入3组样品液中，按供试品溶液制备方法制成100mL的溶液；精密量取续滤液2 mL，置25mL棕色容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀。依法进样测定，并计算回收率。结果见表1。

表1 没食子酸加样回收试验结果（n＝9）

2.3.4 样品含量测定

分别取 3批样品（批号分别为 20100516，20100522，20100525）各5mL，依法制备供试品溶液，分别取20μL，注入高效液相色谱仪，记录峰面积，依法计算含量。结果3批样品中鞣质按没食子酸含量计分别为1.26%，1.21%，1.29%。

3 讨论

痔疮的病因较复杂，《外科正宗》曰：“夫痔者及素积湿热过食炙辅或因久坐而血脉不行，又因七情而过伤生冷，以及担轻负重，竭力之行，气血纵横经络交错，又或酒色过度，肠胃受伤，以致浊气瘀血流注肛门，俱能发痔。”《医宗金鉴》曰：“痔疮开络亦多般，不外风湿燥热源……。”临床上常采用熏洗及外抹药物治疗痔疮急性期。笔者设计了复方五倍子熏洗液，方中五倍子、莲房、枯凡有收敛固涩、止血、消肿、止痛之功效。方中五倍子为君药，臣药为莲房、枯凡，佐以桑寄生扶正扑硝消肿排毒。本方采用纯中药制剂制成外洗液，使药物直接作用于患病部位，针对性强，药物吸收迅速，具有清热解毒、活血化瘀、消肿止痛、生津收口的功效。

有关中药中鞣质含量测定方法已有报道，贾兰秀等［2］采用重量法，但复方中药制剂干扰因素多；朱琼等［3］用紫外分光光度法，但显色不稳定，误差大。参考文献［4－5］，本试验中复方五倍子熏洗液的质量控制采用2010年版《中国药典（一部）》中的方法，将鞣质水解生成没食子酸测定含量，结果没食子酸吸收峰与复方五倍子熏洗液中其他成分分离效果很好，方法可行，结果准确，表明测定没食子酸含量可更客观地控制复方五倍子熏洗液的质量。

复方五倍子熏洗液中五倍子为君药，鞣质是五倍子中的主要有效成分，故选用鞣质作为质量控制指标成分可有效保证其质量。2010年版《中国药典（一部）》规定，五倍子含鞣质以水解的没食子酸（C7H6O5）计不得少于50.0%［1］。复方五倍子熏洗液中五倍子含量为3%，即含鞣质以水解的没食子酸计算理论含量应为1.5%，实际3批样品含量测定结果按没食子酸计算平均为1.25%，即提取率为83.33%。可见，今后应从原料药材及制备工艺等方面把关，以进一步提高复方五倍子熏洗液的质量。

参考文献：

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：附录ⅥB，62.

［2］贾兰秀，温新春.小儿泻速停颗粒鞣质含量的测定［J］.黑龙江医药，2004，17（4）：262 － 263.

［3］朱 琼，包贝华，曹雨诞，等.鸡冠花炭饮片中鞣质的含量测定［J］.南京中医药大学学报，2010，26（1）：62 －64.

［4］王 景，徐秀珍，夏文孝，等.反相高效液相色谱法测定洁白胶囊中没食子酸含量［J］. 中国药业，2011，20（2）：47 －48.

［5］李林晓，牛兰玲，李 菊.高效液相色谱法测定克银丸中没食子酸含量［J］. 中国药业，2006，15（18）：33.