刘立新，柳兵（吴都医药牛尾巴大药房，湖北 鄂州 436054）

谈发明（宜昌市中医院药剂科，湖北 宜昌 443003）

淡竹叶为禾本科植物淡竹叶Lophatherum gracile Brongn的干燥茎叶，所含的化学成分主要是酚酸和黄酮类成分［1－2］，具有优良的抗活性自由基、抗氧化、抗衰老、抗疲劳、增强免疫力、阻断亚硝化反应、抗菌、抑菌等生物学功能［3］。故本文以总黄酮的含量为指标，采用正交试验法对其水提影响因素进行考察，优化水提工艺条件，为淡竹叶的研究与开发奠定基础。

1 材料与仪器

药材淡竹叶购自鄂州市吴都医药有限公司，经湖北中医药大学鉴定教研室鉴定为合格药材；对照品芦丁，中国药品生物检定所，批号：0080-9705；T1900紫外可见分光光度计，北京普析仪器设备有限公司 ；RE-52AA旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；SZ-97自动三重纯水蒸馏器，上海亚荣生化仪器厂；AT-201电子分析天平（d＝0.01mg，瑞士），硝酸铝、亚硝酸钠、无水乙醇、氢氧化钠等均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 吸水率考察

取淡竹叶10g，剪碎，加20倍量水浸泡，每隔30min观察1次浸泡透心情况，直至药材全部浸透，滤出全部未被吸收的水液，计算吸水率为545%～557%，约为5.5倍。

2.2 淡竹叶水提正交试验设计

淡竹叶水提正交试验设计参照文献 ［4］，选用L9（34）正交表安排试验方案，所选因素水平及正交试验方案见表1。

表1 水提工艺正交试验因素水平表

2.3 竹叶总黄酮的含量测定

2.3.1 溶液的配制 对照品溶液的制备：取芦丁对照品适量，精密称定，用30%乙醇制成浓度为0.5mg/ml的溶液，即得。

供试品溶液的制备：称取淡竹叶10g，剪碎，按L9（34）正交表设定方案［5］进行煎煮（第1次加水时，全部按药材吸水率5.5倍，补足吸水量），过滤，合并滤液，浓缩至一定体积，置50ml容量瓶中，加乙醇至刻度，振摇均匀，即得。

2.3.2 最大吸收波长的确定 精密量取2.00ml对照品溶液，于25ml比色管中，加入5%NaNO2溶液1ml，充分振荡6min，再加入5%的Al（NO3）3溶液1.00ml，振荡6min，最后加入10%的NaOH溶液10ml，用蒸馏水定容至25.00ml，摇匀。以无水乙醇为空白，在200～600nm范围进行扫描测定。结果508nm时吸收最大，故选择508nm作为测定波长。

2.3.3 线性关系考察 分别精密量取芦丁对照品溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml于25ml的比色管中，在每个比色管中分别加入5%的NaNO21ml，充分振荡6min，加入5%的Al（NO3）31ml，振荡6min，再加入10%的NaOH溶液10ml，用纯水定容到刻度线，摇匀。以试剂作为空白，于508nm处分别测定吸光度。以浓度C为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线。结果表明，芦丁在0.02～0.10mg/ml范围内，线性关系良好（r＝0.9997），回归方程为Y＝17.825X＋0.0095。

2.3.4 样品含量测定 分别从各组不同实验条件所得的定容样品溶液中移取1.00ml竹叶提取液至25ml比色管中，摇匀；加入5%的NaNO2溶液1ml，充分振荡6min，再加入5%的Al（NO3）3溶液1.00ml，振荡6min，最后加入10%的NaOH溶液10ml，用蒸馏水定容至25.00ml，摇匀。以试剂为空白，于508nm处测定吸光度。

2.4 淡竹叶水提最佳工艺的确定

淡竹叶水提正交试验结果见表2，方差分析结果见表3。结果表明，以总黄酮含量为评价指标，各因素对提取效果的影响大小顺序为D＞C＞A＞B，其中D（提取次数）对提取效果有显著性影响，其次是C（提取时间）。结合表中数据，选择A2B1C1D3作为淡竹叶的最佳水提工艺，即第一次补足吸水量后加10倍量水浸泡2h，其余每次加10倍量水，提取3次，每次提取1h。

表2 水提工艺正交试验表与结果

表3 竹叶总黄酮的含量方差分析表

2.5 最佳工艺验证试验

按优选的最佳工艺条件提取三批样品进行验证试验，测得总黄酮平均含量为5.771mg/ml。结果见表4。验证试验结果与正交试验结果基本一致，说明提取工艺条件稳定、可行。

表4 水提工艺验证试验结果

3 讨论

淡竹叶为禾本科植物淡竹叶Lophatherum gracile Brongn的干燥茎叶，其化学成分主要是酚酸和黄酮类成分，具有优良的抗活性自由基、抗氧化、抗衰老、抗疲劳、增强免疫力、阻断亚硝化反应、抗菌、抑菌等生物学功能。淡竹叶总黄酮常用的提取方法有水提取法、乙醇回流法和超声波提取法，经提取工艺考察后，发现乙醇回流法总黄酮提取率最高，水提取法与乙醇回流法相差不太大，出于工业生产考虑，故本研究选择水提取法提取淡竹叶中总黄酮。以竹叶总黄酮含量为指标，采用正交试验法对水提工艺条件进行优化，合理可行。

［1］李红玉，孙静芸，戴诗文.竹叶化学成分研究 ［J］.中药材，2003，26（8）：562-563.

［2］周惠燕，李士敏.竹叶化学成分研究 ［J］.中国药学杂志，2006，41（9）：662-663.

［3］夏玉红，董晋文，钟耕.竹叶提取物的研究开发现状 ［J］.中国食品添加剂，2009（2）：77-81，148.

［4］曾卫阳，周本杰，黄晓芬.正交试验法优选四君子汤的水提工艺 ［J］.时珍国医国药，2001，12（11）：988-989.

［5］苏亦用，郭巧玲，田素英，等.金樱根质量标准研究 ［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18（15）：109-111.

［编辑］ 一凡