徐文财，刘 秋，李 旦，胡序明,，吴庚华，钱 琨,,3，邵红霞,,3，金文杰,,3，秦爱建,,3

（1.扬州大学教育部禽类预防医学重点实验室，扬州 225009；2.扬州 大学江苏省动物预防医学重点实验室，扬州 225009；3.江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，扬州 225009）

鸡β2-微球蛋白的基因克隆与原核表达

徐文财1，刘 秋1，李 旦1，胡序明1,2，吴庚华2，钱 琨1,2,3，邵红霞1,2,3，金文杰1,2,3，秦爱建1,2,3

（1.扬州大学教育部禽类预防医学重点实验室，扬州 225009；2.扬州 大学江苏省动物预防医学重点实验室，扬州 225009；3.江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，扬州 225009）

本研究通过RT-PCR从正常鸡外周血淋巴细胞总RNA中扩增chβ2m 基因全长片段，然后将其克隆至原核表达载体pET-32a（+），转化大肠杆菌BL21（DE3），用IPTG对其进行诱导表达，利用HiTrap亲和柱对表达产物进行纯化。结果显示，采用RT-PCR扩增出chβ2m基因全长约360 bp，编码120个氨基酸，与基因库公布的相一致，同源性为100%；经0.8 mM IPTG诱导表达后，SDS-PAGE分析发现chβ2m融合蛋白主要以可溶性形式存在于细菌裂解上清；利用His标签纯化该蛋白，SDS-PAGE分析仅见约34 kDa大小的chβ2m融合蛋白条带；Western-blot分析表明，纯化后的chβ2m融合蛋白与特异单克隆抗体反应呈现特异性的条带。以上结果证实，本研究成功表达并获得了纯化的可溶性chβ2m融合蛋白，为进一步对chβ2m结构及其功能研究奠定基础。

β2-微球蛋白；基因克隆；原核表达

β2-微球蛋白（β2-microglobuli, β2m）由Berggard[1]于1968年首先从肾小管病变患者的蛋白尿中分离出来。β2m是由99个氨基酸残基组成的小分子量非糖基化蛋白，约12 kDa[2]。所有有核细胞均能合成[3]，β2m作为主要相容性复合体（major histocompatibility complex, MHC）I类分子的β链（轻链），对维持MHC-I类分子天然构型的稳定及执行正常的生理功能具有重要作用[4]。……