杨春涛，刘海青，李 蓉，江志勇，骆桂法，孙静贤，黄相中

(1.云南民族大学 民族药资源化学国家民委-教育部重点实验室，云南 昆明 650500； 2.青海省食品药品检验所，青海 西宁 810016)

东方草莓(FragariaOrientalisLozinsk)为蔷薇科(Rosaceae)草莓属(Fragaria)植物[1-3]. 我国从南到北蕴藏着种类和数量丰富的野生草莓[3-7], 主要分布于青海、甘肃、陕西、山西、四川以及华中各省，朝鲜、蒙古及俄罗斯远东地区也有分布，生于山坡草地或林下，海拔在400～6 000 m[1]. 东方草莓藏药名为“志达萨增”，以其干燥全草入药，花期采收，除去杂质及根须，晾干. 本品茎细弱，柔软，气微，味酸、涩，有引吐肺痰，托引脑腔脓血之功效.用于血热性化浓症，肺胃瘀血，黄水病脓疡[8]，为藏药经典验方“藏药七十味珍珠丸 (然钠桑培)”、“ 二十五味珍珠丸”、“骨质增生乙组合(压迫神经引起疼痛)”、“八味秦皮丸”等的重要成分. 目前尚未见有关东方草莓化学成分研究的报道. 我们对东方草莓药材进行了提取分离，发现(+)-儿茶素是其中的一个主要化学成分. 查阅2010版《中国药典》，并未发现有关东方草莓药材质量标准的内容，而药理研究表明，(+)-儿茶素具有止泻、解毒、止血、降血糖作用，也具有维生素P样作用，还可用于治疗各种肝脏疾病，特别是急性肝炎. 此外，尚可抗病毒、杀真菌、抗癌及预防胃溃疡等作用[9]. 因此，可将(+)-儿茶素作为东方草莓中的特征性成分. 为丰富2015版《中国药典》的内容，提高我国传统药材的质量标准，我们在国家药典委员会的统一部署和协调下，对东方草莓药材的质量进行了深入研究，建立东方草莓中(+)-儿茶素的薄层色谱指纹图谱.

1 实验材料

1.1 药材样品

10批东方草莓药材为青海省食品药品检验所提供，采自西藏及成都和青海(见表1).

表1 10份东方草莓完整药材

1.2 对照品

(+)-儿茶素对照品由中国药品生物制品鉴定所提供，批号：11877-201203，纯度为97.20%.

1.3 仪器与试剂

硅胶(200～300目)，硅胶G254薄层板，反相硅胶，定量毛细管(1 μL)，磷钼酸显色剂(25%磷钼酸乙醇溶液)，三氯化铁显色剂(1% FeCl3和50%乙醇水溶液)、硫酸显色剂(10% 硫浓酸乙醇溶液)，所用试剂均为分析纯.

2 方法与结果

2.1 方法

2.1.1 提取与分离

取东方草莓药材(西藏2)粗粉150 g，用95% 乙醇浸泡、超声提取3次，减压回收溶剂后，将提取物(14.5 g)进行反相硅胶柱层析，依次用V(甲醇):V(水)=1∶9、1∶4、1∶1、1∶0进行洗脱，得到3个组分，将第1个组分(750 mg)进行正相硅胶柱层析，依次用V(氯仿)∶V(甲醇)=20∶1、15∶1、10∶1、5∶1、1∶1、0∶1进行洗脱，得到化合物Ⅰ.

2.1.2 结构鉴定

化合物Ⅰ 白色粉末，分子式为C15H14O6, ESI-MS(m/z)289.1[M-H]-,1H NMR (400 MHz, MeOD)δ: 2.53 (1H, dd,J= 8, 8.4 Hz, H-4), 2.87 (1H, dd,J= 5.6, 5.6 Hz, H-4), 4.00 (1H, m, H-3), 4.58 (1H, d,J=7.2 Hz, H-2), 5.88 (1H, d,J=2.4 Hz, H-6), 5.95 (1H, d,J=2 Hz, H-8), 6.74 (1H, dd,J= 1.6, 2 Hz, H-6′), 6.79 (1H, d,J= 8 Hz, H-5′), 6.86 (1H, d,J= 8 Hz, H-2′) .13C NMR (400 MHz, MeOD)δ: 82.9(C-2), 68.8(C-3), 28.5(C-4), 156.9(C-5), 96.3(C-6), 157.6(C-7), 95.6(C-8), 157.8(C-9),100.9(C-10), 132.2(C-1′), 115.3(C-2′), 146.3(C-3′), 146.2(C-4′), 116.1(C-5′), 120.1(C-6′).以上数据与文献[10]对照基本一致，鉴定该化合物为(+)-儿茶素, 从而确定东方草莓药材(西藏2)中含(+)-儿茶素成分.

2.1.3 对照品溶液的制备

取(+)-儿茶素对照品，加甲醇制成0.25 mg/mL的对照品溶液.

2.1.4 供试品溶液的制备

取药材粉末4.0 g于具塞锥形瓶中，加50 mLV(甲醇)∶V(水)=1∶1，浸泡30 min后，超声提取20 min，过滤，滤液减压浓缩，用甲醇15 mL分2次溶解残渣，静置，过滤，滤液浓缩至2 mL作供试品溶液. 同样的方法处理另外9批药材，得10批供试品溶液.

2.1.5 薄层色谱

吸取供试品溶液3 μL，对照品溶液2 μL，分别点于硅胶G薄层板上，以V(甲苯)∶V(乙酸乙酯)∶V(甲醇)∶V(甲酸)=1∶2∶0.2∶0.1为展开剂，展开缸用展开剂预平衡15 min, 上行展开，展距8 cm，取出，平置晾干，喷以25% 磷钼酸乙醇溶液，在110 ℃加热至斑点显色清晰[11](如图1)，图中a代表(+)-儿茶素、1～10见表1实验编号.

由图1可见，不同产地东方草莓完整药材均含有(+)-儿茶素成分，其Rf值为0.42，它们的色谱图也十分相似.

3 讨论

3.1 供试品溶液制备

曾用甲醇超声提取，但由于此条件下杂质提取率较大，影响薄层色谱法对(+)-儿茶素的鉴别，所以采用V(甲醇)∶V(水)=1∶1提取方法，可排除其它成分干扰，得到了良好的提取效果[12-13].

3.2 展开剂选择

曾经选用V(氯仿)∶V(甲醇)∶V(甲酸)=5∶1∶0.02、V(正丁醇)∶V(乙酸)∶V(水)=10∶0.1∶0.1、V(丙酮)∶V(水)=10∶0.1、V(氯仿)∶V(乙酸乙酯)=8∶2等，但均不能将儿茶素和其他化合物斑点分开或斑点拖尾，后参考薄层色谱法(2010版药典一部)，选用V(甲苯)∶V(乙酸乙酯)∶V(甲醇)∶V(甲酸)=1∶2∶0.2∶0.1为展开剂，得到较好的分离效果，且斑点清晰，无杂质成分干扰.

3.3 显色剂选择

曾选用三氯化铁显色剂(1% FeCl3+50% 乙醇水溶液)、硫酸显色剂(10% 硫浓酸乙醇溶液)，但显色效果均不理想，硅胶板背景颜色较深，斑点模糊，影响观测，后采用磷钼酸显色剂(25% 磷钼酸乙醇溶液)，斑点清晰，显色效果很好.

4 结语

东方草莓供试液以及对照品溶液宜新鲜制备, 并于低温冰箱中贮存备用. 显色剂用前再配置, 久置颜色会变黄，显色效果不好.本文选用(+)-儿茶素作为对照品是合理的，不同产地的东方草莓药材薄层色谱结果证明了该鉴别方法的可行性和专属性.该方法操作简便，为新版《药典》中东方草莓质量标准的建立提供了参考资料.

参考文献:

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