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(青岛大学医学院附属医院妇科，山东 青岛 266003)

卵巢癌发现时多为晚期，死亡率位居妇科恶性肿瘤首位。分化抑制因子-1(Id-1)能阻碍DNA与转录因子结合，调控细胞增殖分化[1]，与肿瘤血管生成和肿瘤的发生、发展及侵袭密切相关。血红素加氧酶(HO)作为一种诱导型蛋白存在于哺乳动物体内，当机体器官受损时诱导HO-1表达发挥抗氧化作用[2],HO-1过表达不仅能刺激肿瘤细胞生长,增强肿瘤细胞抗氧化及抗凋亡能力,而且能促进肿瘤血管生长和肿瘤细胞转移等。本文采用免疫组化方法检测了Id-1和HO-1在卵巢上皮癌、卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织表达情况，探讨两种因子在卵巢上皮癌发生、发展中可能的作用。

1 材料与方法

1.1 标本及其来源

2010年1月—2012年2月，收集我院妇科病人的手术组织标本，其中卵巢上皮癌组织标本50例(均行卵巢癌肿瘤细胞减灭术，术前均未行化疗或放疗,术后病理确诊为卵巢上皮癌),良性卵巢肿瘤标本45例及正常卵巢组织标本15例。卵巢癌病人年龄27～73岁，其中≥50岁29例，<50岁21例；高中分化19例，低分化31例；肿瘤直径≥5 cm者31例，<5 cm者19例；术前有大量腹水者33例,无或少量腹水者17例；术前CA125水平≥200 kU/L者42例，<200 kU/L者8例；浆液性腺癌41例，黏液性腺癌6例，透明细胞癌3例；淋巴结转移阳性者30例，淋巴结转移阴性者20例；I～Ⅱ期22例，Ⅲ～Ⅳ期28例(按FIGO 2000年卵巢癌分期标准)。对照组分别为因卵巢肿瘤行患侧卵巢切除术的病人(术后病理为良性卵巢肿瘤)和因子宫肌瘤行全子宫加双附件切除术的病人(术后病理均为子宫平滑肌瘤，卵巢组织无异常)。

1.2 主要试剂

Id-1及HO-1单抗购于北京博奥森生物技术有限公司，SP试剂盒和DNA显色试剂盒均购于北京 中杉金桥生物技术有限公司，磷酸盐缓冲液(PBS)购自上海研生生物技术有限公司。

1.3 检测指标和方法

Id-1及HO-1的检测均采用免疫组织化学SP法,主要步骤按照试剂盒说明书操作。试验以已知Id-1及HO-1阳性切片作为阳性对照，以PBS替代一抗作为阴性对照。

1.4 结果判定

Id-1阳性表达主要在细胞质，部分在细胞核中,HO-1阳性表达位于细胞核。随机选择5个高倍视野，计数100个以上肿瘤细胞。根据阳性细胞数及细胞染色强度进行判断。阳性细胞数<5%，计0分；阳性细胞数5%～25%，计1分；阳性细胞数26%～50%，计2分；阳性细胞数51%～75%，计3分；阳性细胞数>75%，计4分。根据阳性着色强度不同依次计0、1、2、3分(不着色为0分，浅棕色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分)，将每张切片的两项分数累计，0分为阴性，1～2分为弱阳性(+)，3～4分为阳性()，5～6分为强阳性()。

1.5 统计学方法

采用SPSS 17.0统计软件对数据进行χ2检验或Fisher精确概率检验。Id-1及HO-1的关系采用Spearman等级相关分析。

2 结 果

2.1 各组Id-1及HO-1的表达

Id-1在细胞质和细胞核中均有表达，卵巢上皮癌、良性卵巢肿瘤及正常卵巢组织中Id-1阳性表达率分别为88.0%、48.9%与13.3%。HO-1在细胞核中表达，卵巢上皮癌、良性卵巢肿瘤及正常卵巢组织中HO-1阳性表达率分别为76.0%、44.4%和0。Id-1和HO-1在正常卵巢、卵巢良性肿瘤及卵巢上皮癌组织中的表达差异均有显著性(χ2=6.838～31.097,P<0.05)。

2.2 Id-1及HO-1表达与卵巢上皮癌病人临床病理特征的关系

Id-1和HO-1的表达与病人年龄、肿瘤大小、临床分期和有无腹水等均无关(P>0.05)，而与术前的CA125水平、病理分级和淋巴结转移有关(χ2=4.678～7.739,P<0.05)。见表1。

2.3 卵巢上皮癌组织中Id-1及HO-1表达相关性

在50例卵巢上皮癌组织中，Id-1及HO-1表达均阳性者29例，均阴性者9例，两者表达呈正相关(r=0.390,P<0.05)。

表1Id-1和HO-1表达与卵巢上皮癌病人临床病理特征的关系(例)

临床病理因素nId-1+-χ2PHO-1+-χ2P年龄(岁) ≥5029263236 <50211830.1790.6721560.4150.520肿瘤大小(d/cm) ≥53128162213 <5191680.4170.5191671.1330.287腹水 大量332910257 无或少量171550.0010.9711340.0030.955术前CA125(z/kU·L-1) ≥200423910356 <2008555.8640.015347.7390.005组织学类型 浆液性腺癌4125163110 其他9630.1010.750720.0190.890临床分期 Ⅰ～Ⅱ22199154 Ⅲ～Ⅳ2825100.1000.7522331.3170.251病理分级 中高分化19149115 低分化3130115.9740.0152785.5070.019淋巴结转移 无201512129 有302995.3350.0212654.6780.031

3 讨 论

3.1 Id-1与卵巢上皮癌的关系

Id-1是Id蛋白家族成员，既参与正常细胞分化调控，还影响肿瘤细胞分化，主要通过促进肿瘤血管生成以及浸润转移,调控细胞定向分化，抑制细胞凋亡等发挥作用[3]。肿瘤的血管生成受多种细胞因子调控，其中血管内皮细胞生长因子(VEGF)是肿瘤生长及远处转移的必要条件。LING等[4]在前列腺癌细胞中通过RNA干扰抑制Id-1的表达，结果显示VEGF表达水平也明显下降。最近研究显示,在宫颈癌进展中,Id-1可能是通过促进肿瘤血管生成而促肿瘤生成的[5]。Id-1诱导的癌细胞增生可以通过抑制p53信号通路和活化NF-κB信号通路，下调caspase3的表达水平，阻止肿瘤细胞的凋亡[6]。还有研究结果显示，Id-1过表达与EGFR表达增高有关，阻断Id-1的表达可抑制卵巢癌细胞浸润转移[7]。上述研究均证实，Id-1可有效促进肿瘤发生、发展。本文研究结果显示，Id-1在卵巢癌组织中高表达。SCHINDL等[8]研究亦显示，卵巢癌组织Id-1过表达，与本研究结果一致。同时本研究结果显示，Id-1的表达与病人术前CA125水平、淋巴结转移和病理分级密切相关。这表明Id-1可能与卵巢上皮癌的发生、发展有关。

3.2 HO-1与卵巢上皮癌的关系

HO-1对肿瘤细胞具有抗凋亡作用,可能是通过降低细胞内促氧化剂浓度、增高胆红素水平、提高CO生成来抑制细胞凋亡。HO-1与肿瘤的血管生成密切相关，而血管生成与肿瘤生长、侵袭和转移有关。主要表现在HO-1和VEGF之间的作用。在研究VEGF对HO-1的影响实验中发现,在肺腺癌细胞中加入HO-1抑制剂锌-原卟啉后,VEGF合成减少,血管生成被抑制，同时VEGF对HO-1合成有调节作用[9]。近期研究结果证实,体外下调HO-1的表达可通过影响caspase3活性抑制人肝癌细胞的凋亡[10]。HO-1所具有的抗凋亡作用还可以通过Nrf2-ARE通路来实现。保肝药物可激活Nrf2-ARE，通过抗氧化酶(如HO-1)抑制ROS的产生，对肝细胞发挥保护作用[11-12]。总之，HO-1通过以上途径促进肿瘤的发生、发展。

本文的研究结果显示，HO-1在卵巢癌组织中呈高表达，推测HO-1可能是卵巢癌形成的重要因素之一。同时本文的研究结果还显示，HO-1阳性表达与病人术前CA125水平、淋巴结转移和病理分级密切相关。由此可见，肿瘤恶性程度越高，HO-1的表达水平越高。这表明HO-1可能与卵巢上皮癌的发生、进展有关。

3.3 Id-1和HO-1之间的关系

本研究结果显示，卵巢上皮癌组织中Id-1和HO-1的表达呈正相关,即Id-1活化的肿瘤组织中存在HO-1的高水平表达。关于卵巢癌组织中Id-1和HO-1相关性研究,国内外鲜有报道。本研究可推测卵巢癌形成及发展过程中,两者具有协同作用,很可能存在VEGF、caspase3共同通路，但具体作用机制还需更深入的研究。这些研究可能成为卵巢癌治疗的实验依据。

总之，Id-1和HO-1的表达水平与卵巢癌发生、发展相关,为卵巢癌进一步的研究和治疗提供了新依据，有望作为卵巢上皮癌的诊断性标志物，并为卵巢癌治疗提供新思路。

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