靳文斌 张萧萧 李玉 路福平

（天津科技大学生物工程学院 工业发酵微生物教育部重点实验室 工业酶国家工程实验室 天津市工业微生物重点实验室，天津 300457）

合成唾液酸乳糖重组大肠杆菌的构建

靳文斌 张萧萧 李玉 路福平

（天津科技大学生物工程学院 工业发酵微生物教育部重点实验室 工业酶国家工程实验室 天津市工业微生物重点实验室，天津 300457）

唾液酸寡糖具有抗感染、提高免疫力、促进双歧杆菌增殖等功能，对其微生物合成方法的研究具有重要的理论和应用价值。克隆和表达来源于Campylobacter jejuni的N-乙酰葡萄糖胺异构酶基因（neuC）、乙酰神经氨酸合成酶基因（neuB）、CMP-乙酰神经氨酸合成酶基因（neuA）和来源于Nesseria meningitidis的唾液酸转移酶基因（nst），利用表达载体pSTV29，在大肠杆菌Escherichia coli JM109内构建合成唾液酸乳糖的代谢途径。在接种量2%、装液量50 mL/250 mL三角瓶、摇床转速180 r/min、温度34℃的条件下发酵30 h，并以10 g/L乳糖为底物，利用HPLC检测到唾液酸乳糖的合成量为2.45 g/L，为人乳唾液酸寡糖及其类似物的异体合成提供了新的思路。

唾液酸乳糖 大肠杆菌 代谢工程

人乳寡糖及其类似物由于安全、可靠，不产生抗药性，并且具有部分免疫功能［1］，以人乳寡糖及其类似物为原料开发新型药物成为当前医药领域的一大热点。目前我国对人乳寡糖的研究开发仍处于初始阶段且多采用化学合成法获得人乳寡糖及其类似物。由于糖苷供体价格昂贵［2］、合成路径复杂［3］及分离纯化困难，限制了人乳寡糖及其类似物的工业应用。伴随着相关基因不断解析和微生物代谢路径不断得到阐明［4-7］，使得利用生物技术的方法大量获得人乳寡糖成为可能。……