赵学军 国果 吴沁怡 陶如玉 吴建伟

（贵阳医学院基础医学院，贵阳 550004）

家蝇伴侣蛋白TCP-1基因的序列分析、克隆及诱导表达

赵学军 国果 吴沁怡 陶如玉 吴建伟

（贵阳医学院基础医学院，贵阳 550004）

旨在对EST筛选得到的家蝇伴侣蛋白TCP-1（MD-TCPⅠ）基因进行序列分析，克隆其cDNA序列并在大肠杆菌中诱导表达。采用EST测序技术从已构建的家蝇幼虫cDNA质粒文库中筛选到MD-TCP Ⅰ基因，对其进行序列测定和分析。以该基因的cDNA文库质粒为模板，通过PCR的方法进行扩增，以pET-28a（+）为载体构建重组质粒，再转化到表达宿主大肠杆菌BL21（DE3）中，IPTG诱导表达。表达产物通过SDS-PAGE进行鉴定。结果显示，MD-TCP Ⅰ基因ORF全长753 bp，编码250个氨基酸，理论分子量27.07 kD；等电点5.92，该序列编码的蛋白属于热休克蛋白60家族的TCP。构建了正确基因序列MD-TCP Ⅰ重组表达质粒，重组蛋白在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达。

家蝇 TCP 序列分析 基因克隆 表达

伴侣蛋白是一大类在生物大分子折叠、组装及降解过程中起着重要的协同作用，但自身并不发生任何变化的存在于生物体内的蛋白质分子［1］。热休克蛋白60（HSP60）是HSPs类分子伴侣，是一种与细胞应激损伤关系密切的蛋白质，广泛存在于原核及真核细胞中。HSP60在正常细胞中表达很低，但是在高温、缺氧、感染、创伤等因素刺激下表达增强，对提高细胞耐受应激的能力，维持细胞内环境的稳定具有重要作用［2］。TCP属于HSP60家族，是一种广泛存在于细胞浆中的异型寡聚蛋白，也是迄今为止真核细胞胞浆中发现的唯一一个伴侣素［3］。研究发现正常条件下，HSP60以稳定状态存在于细胞质