周夏 郭博智 高艳玲 赵奎军 樊东

（东北农业大学农学院，哈尔滨 150030）

苜蓿夜蛾促前胸腺激素基因的克隆与原核表达

周夏 郭博智 高艳玲 赵奎军 樊东

（东北农业大学农学院，哈尔滨 150030）

促前胸腺激素（Prothoracicotropic hormone，PTTH）是一类重要的昆虫激素，它对昆虫生长、蜕皮、变态、滞育具有重要调控作用。以苜蓿夜蛾5龄幼虫为材料提取总RNA，利用RT-PCR和RACE技术，扩增得到苜蓿夜蛾促前胸腺激素基因的cDNA序列，该序列含有823个碱基，包括1个681个碱基的开放阅读框，编码1个含226个氨基酸的蛋白，分子量约为26.3 kD，等电点为8.51。序列分析表明，苜蓿夜蛾PTTH的氨基酸序列与其他昆虫，尤其是鳞翅目夜蛾科昆虫的PTTH高度同源。获得的基因已登录GenBank，登录号为JF731347。利用原核表达载体pET21b在大肠杆菌中成功表达了苜蓿夜蛾PTTH基因，并用Ni-NTA亲和层析柱将带His-tag的目的蛋白进行纯化。

苜蓿夜蛾 促前胸腺激素 基因序列克隆 原核表达

促前胸腺激素（Prothoracicotropic hormone，简称PTTH）是由大脑神经分泌细胞产生，刺激前胸腺分泌蜕皮酮的神经肽类激素，对昆虫的生长发育、蜕皮、变态、滞育［1-3］等起到重要的调控作用。作为第一个在无脊椎动物中发现的激素，PTTH的研究始于1922年，由波兰学者Kopec通过对舞毒蛾Lymantria dispar幼虫蜕皮前进行结扎、摘除脑的试验发现昆虫形态变化受脑控制，他将其命名为脑激素［4］。1940年Wigglesworth在长红猎椿Rhodnius prolixus中发现脑激素是由脑神经分泌细胞产生的［5］。随后Williams于1947年以惜古比天蚕的滞育蛹为材料，证明这种脑激素具有促进前胸腺分泌蜕皮激素诱导变态的作用，所以把脑激素改称为PTTH［6］。……