唐小丽 伍文宪 韩磊 杨秀芬

（中国农业科学院植物保护研究所 植物病虫害生物学国家重点实验室，北京 100081）

真菌蛋白激发子PevD1互作蛋白的酵母双杂交筛选及融合蛋白的原核表达

唐小丽 伍文宪 韩磊 杨秀芬

（中国农业科学院植物保护研究所 植物病虫害生物学国家重点实验室，北京 100081）

PevD1是大丽轮枝菌（Verticillium dahliae）发酵液中分离纯化的一种新蛋白激发子，能激发烟草和棉花的免疫防御反应，提高抗病性。旨在深入研究PevD1的作用机理，利用酵母双杂交系统，以PevD1为诱饵蛋白，筛选拟南芥中PevD1的互作蛋白，经复筛、回转验证得到3个候选互作蛋白基因R1，R2和R4。利用同源克隆技术获得烟草中互作蛋白编码基因NR1、NR2和NR4；经酵母双杂交验证其中的NR2蛋白能与PevD1特异性结合。利用原核表达系统，成功构建了重组表达载体pMAL-C2XNR2并转化大肠杆菌细胞，经IPTG诱导获得了可溶性表达的NR2融合蛋白。

蛋白激发子 互作蛋白 酵母双杂交 原核表达

蛋白激发子能激活植物免疫系统，诱导植物广谱抗性，成为现代植物保护新的研究方向。蛋白激发子激发植物防御反应主要包括植物对激发子的识别（与植物靶标结合）、信号传导以及防卫基因表达调控等［1-3］，其中与植物靶标结合是蛋白激发子诱导植物抗性的开关［4，5］，也是揭示激发子诱导植物抗性机制的关键。尽管已经分离了众多的微生物激发子（效应子），但只鉴定了少数激发子的靶标，主要是寡糖激发子和细菌、卵菌激发子，其中研究比较清楚的是细菌鞭毛效应蛋白flg22的受体FLS2和延伸因子Tu（Elongation factor Tu，EF-Tu）的受体EFR［6-8］。……