刘靓蕾 张妍 孙晓蕾 韩岚 满达呼斯琴 哈斯阿古拉

（内蒙古大学生命科学学院 内蒙古自治区牧草与特色作物生物技术重点实验室，呼和浩特 010021）

人工合成的纳豆激酶基因转化烟草的研究

刘靓蕾 张妍 孙晓蕾 韩岚 满达呼斯琴 哈斯阿古拉

（内蒙古大学生命科学学院 内蒙古自治区牧草与特色作物生物技术重点实验室，呼和浩特 010021）

根据植物偏爱密码子人工合成的纳豆激酶基因sNK和其中插入番茄果实特异表达基因E8第一内含子的纳豆激酶基因sNK-E8i，通过农杆菌侵染的方法转化到烟草NC89中。经PCR检测，得到12株转sNK基因烟草植株和10株转sNK-E8i基因烟草植株，初步证明目的基因已整合到烟草基因组中；RT-PCR检测有9株转sNK基因烟草植株和10株转sNK-E8i基因烟草植株为阳性；通过RT-qPCR将两种基因在烟草中的表达量进行比较，结果表明转sNK-E8i基因的植株中纳豆激酶的表达量比转sNK基因的植株中高；通过纤维蛋白平板法检测其活性，共有5株转sNK基因烟草植株和3株转sNK-E8i基因烟草植株检测到溶圈，说明目的基因在部分转基因烟草中可正常转录和翻译并表现出溶栓活性。经加代培养已得到T1代转基因植株。

纳豆激酶 人工合成 植物偏爱密码子 烟草 纤维蛋白平板法

纳豆激酶（nattokinase，NK）是Sumi等［1］于1987年首先在日本传统发酵食品纳豆中发现并命名。该酶是由纳豆枯草杆菌（Bacillus subtilis var. natto）产生的一种碱性丝氨酸蛋白酶，具有非常高的溶栓活性。1992年，Nadamura等［2］首次克隆了纳豆激酶基因并测定了全基因序列，使得利用基因工程技术生产纳豆激酶成为可能。……