刘丹 吴凤芝

（东北农业大学园艺学院，哈尔滨 150030）

分蘖洋葱查尔酮异构酶基因的克隆及表达载体的构建

刘丹 吴凤芝

（东北农业大学园艺学院，哈尔滨 150030）

旨在得到分蘖洋葱查尔酮异构酶基因，探明该基因的功能。克隆查尔酮异构酶基因并构建了其超表达和干扰载体，以期得到用于研究查尔酮异构酶基因功能的表达载体。从分蘖洋葱叶片中克隆得到查尔酮异构酶基因cDNA 全长743 bp，GenBank登录号为KJ489062。结果显示，该基因633 bp的开放读码框编码210个氨基酸的多肽序列。将PCR 扩增克隆得到的分蘖洋葱查尔酮异构酶基因片段连接到干扰载体pCAMBIA1301和超表达载体SOL2095中，成功构建了35S 启动子控制的植物表达双元载体pCAMBIA1301-CHI和SOL2095-CHI。

分蘖洋葱 查尔酮异构酶 基因克隆 载体构建

黄酮类化合物是多酚类次生代谢物质，由苯丙烷代谢途径合成。黄酮类化合物具有很多重要功能，如紫外防护、抗病原微生物、参与花色形成、植物的育性及植物与微生物相互识别协作等。查尔酮异构酶（Chalcone isomerase，CHI）也称查尔酮黄酮异构酶（Chalcone flavanone isomerase）［1］，是类黄酮物质合成的关键酶之一［2］，可催化分子内环化反应，使双环的查尔酮转化为有生物学活性的三环（2S）-黄烷酮。CHI 蛋白以单体的形式普遍存在于大多数植物中，分子量因植物组织而异，约24-29 kD［3］。目前，查尔酮异构酶基因在几种植物中已被克隆：如雪莲［4］、矮牵牛［5］、紫花苜蓿［6］、百合［7］、水稻［8］、马铃薯［9］等。CHI 基因表达量的高低不仅对花色影响大，同时也会影响到黄酮类代谢产物的合成。

分蘖洋葱（Allium cepa var. agrogatum Don.）俗称毛葱，为百合科葱属草本植物。……