郑 倩,刘 华,曹弟勇,杨尚君,赵小蓉,米贵飞,赵雅茜,肖昊卓

(川北医学院 1.机能实验中心；2.药理学教研室；3.寄生虫学教研室；4.2012级临床医学系，四川 南充 637100)

研究证实IL-1β是重要的内源性细胞因子，其可通过影响NO[1]、Ca2+[2]、线粒体膜电位、ROS[3]以及内质网应激[4]多种途径导致细胞凋亡，最终导致糖尿病。虫草菌丝(cordyceps sinensis,CS)是人工发酵培养得到的菌丝，近年来其对糖尿病的防治作用受到了广泛关注，我们前期工作采用IL-1β损伤离体乳鼠胰岛细胞并用CS进行干预，发现CS可以增加乳鼠胰岛细胞活性和分泌功能，其保护机制与降低细胞内Ca2+浓度，降低NO、ROS的生成以及提高SOD、GSH-PX的活性有关[5-6]。目前国内外的研究证实解偶联蛋白2(uncoupling protein 2，UCP-2)可以通过影响ATP的生成、调节胰岛素的分泌，抑制细胞活性氧(reactive oxygen species，ROS)的生成，诱发胰岛细胞的凋亡参与糖尿病的发生发展过程，成为了研究的热点。本研究探讨CS对IL-1β诱导的MIN6细胞凋亡的作用以及机制是否与ROS水平和UCP-2表达有关。

1 材料和方法

1.1 主要试剂与仪器

MIN6细胞购自上海拜力公司，CS(上海雅吉，A-0159)，IL-1β(invitrogen,792008D)，高糖DEEM，胎牛血清(hyclone,nzk0677)，Hochest33342，Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒(Beyotime,C1056)，活性氧检测试剂盒(南京建成,A087)。荧光显微镜(Leica,德国)，荧光分光光度计(BIO-RAD,美国)，酶标仪(BIO-RAD,美国)，流式细胞仪(Acuuri，美国)。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养与处理 选用第28～35代MIN6细胞为研究对象,MIN6细胞在含150 mL/L FBS、青、链霉素各10 U/mL的DMEM培养基中，于37 ℃、5% CO2饱和湿度条件下培养。每2～3 d换液1次，5～6 d传代1次，80%汇合时进行实验。以每孔5×105mL/L细胞接种于细胞培养板，培养24 h后，进行实验分组。随机分组：(1)正常对照组；(2)IL-1β(20 nmol/L)组；(3)IL-1β+低剂量CS1组；(4)IL-1β+高剂量CS2组，每组平行孔为6孔。正常……