张 祥 乔 健 (复旦大学神经病学研究所，上海 200040)

同型半胱氨酸(Homocysteine，Hcy)是一种含硫的非必需氨基酸，是蛋氨酸代谢的中间产物，它在体内的蓄积，可造成高同型半胱氨酸血症(Hyper-homocysteinemia，HHcy)。HHcy 是心脑血管疾病重要的危险因素。然而，在多发性硬化(Mutiple Sclerosis，MS)等神经变性疾病中也发现存在HHcy［1-3］，其病理机制和意义目前还不清楚。实验性变态反应性脑脊髓炎(Experiment autoimmune encephalomyelitis，EAE)是MS 较为理想的动物模型［4］。本研究旨在通过对伴或不伴HHcy 的EAE 小鼠的观察，探讨HHcy 在MS 中出现的原因及可能的病理意义。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 普通育成料M02(上海斯莱克实验动物有限公司)，MOG35-55 肽段(北京联科生物公司)，结核菌素(Mycobacterium Tuberculosis H37Ra，TB，DIFCO Laboratory)，百日咳毒素(Pertussis Toxin，PTX，List Biology Laboratory)，SBDF(同仁化学研究所)，蛋氨酸(Sigma-Aldreich 公司)，磷酸二氢钾、甲醇、苏木精-伊红(HE)(国药集团)，不完全弗氏佐剂(Sigma 公司)，IL-17、IFN-γ 和TNF-α 细胞因子ELISA 检测试剂盒(eBioscience Company)。

1.2 实验小鼠和饮食 健康雌性8 周龄C57BL/6小鼠20 只，购自上海斯莱克实验动物有限公司，清洁级饲养，自由饮食，自然作息。以普通育成料M02喂养，其中10 只在制模前48 小时开始予饮水中添加4%蛋氨酸。

1.3 EAE 小鼠模型的建立及症状评估 称取MOG35-55 肽段粉剂3 mg，溶于1 ml PBS 中;取5 mg TB，溶于1 ml 不完全弗氏佐剂;上述所制备的两种液体以1 ∶1比例，采用针管混合器充分混合，制备成油包水样乳白色混悬液。

分别取5 只有和没有4% 蛋氨酸喂养的C57BL/6 小鼠，于背部脊髓二侧四点皮下注射含MOG35-55 混悬液各50 μl，同时尾静脉注射PTX 200 ng，48 h 后再次尾静脉注射PTX 200 ng 加强免疫。每2 d 记录小鼠体重，评估症状［0 分，无症状;1 分，垂尾;2 分，行路不稳/后肢力弱/翻正反射迟钝;3 分，后肢麻痹和(或)前肢力弱;4 分，前肢麻痹;5 分，死亡］。……