刘淑华

辽宁省朝阳市食品药品检验所，辽宁朝阳122000

反相高效液相色谱法测定盐酸氨溴索注射液的含量

刘淑华

辽宁省朝阳市食品药品检验所，辽宁朝阳122000

目的建立反相高效液相色谱法测定盐酸氨溴索注射液含量的方法。方法色谱柱：Kromasil C18（4.6mm× 150 mm，5μm）；流动相：0.005 mol/L磷酸氢二铵溶液（磷酸调节pH值至7.0）-乙腈（48∶52）；柱温：室温；流速：1.0 mL/min；检测波长：248 nm；进样体积：20μL。结果盐酸氨溴索的线性范围为0.060 04~1.501 00μg（r＝0.9999，n=5）；盐酸氨溴索注射液的高、中、低3种浓度的平均加样回收率为99.4%（RSD=0.6%，n=9）。结论该方法专属性强、准确、重现性好，可用于盐酸氨溴索注射液含量的测定。

反相高效液相色谱法；盐酸氨溴索注射液；含量测定

盐酸氨溴索注射液适用于伴有痰液分泌异常或排痰功能不良的急慢性支气管肺疾病的祛痰治疗，尤其是慢性支气管炎急性发作喘息型支气管炎支气管哮喘等症[1]，其现行标准为国家食品药品监督管理局标准YBH21062005（属于单页试行标准）[2]，采用紫外分光光度法测定盐酸氨溴索的含量，由于受降解产物的干扰，方法专属性不强，本研究用反相高效液相色谱法[3]测定，方法专属性强，准确，重现性好，可用于盐酸氨溴索注射液含量的测定[4-17]。结果如下：

1 仪器与试药

高效液相色谱仪：型号Waters e2695-2489；对照品：盐酸氨溴索（批号：100599-200502，中检所）；盐酸氨溴索注射液（康哲制药有限公司，批号：20130227、20130411、20130618）；乙腈：色谱纯；磷酸、磷酸氢二铵：分析纯，水：纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Kromasil C18（4.6mm×150mm，5μm）；流动相：0.005 mol/L磷酸氢二铵溶液（磷酸调节pH值至7.0）-乙腈（48∶52）；流速：1.0 m L/min；柱温：室温；检测波长：248 nm；进样体积：20μL；理论塔板数以盐酸氨溴索峰计算为8000；拖尾因子：1.04；盐酸氨溴索与相邻杂质峰之间的分离度均大于1.5。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品储备液精称盐酸氨溴索对照品15.01mg，置100 mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得150.1μg/mL的溶液。

2.2.2 对照品溶液精取对照品储备液5mL，置25mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得浓度为30.02μg/mL的溶液。

2.2.3 供试品溶液精取供试品适量，加流动相稀释成30μg/mL的溶液。

2.3 专属性考察

精取盐酸氨溴索注射液适量（相当于盐酸氨溴索1.5 mg），经下列条件破坏：A.加盐酸溶液（1.0 mol/L）5mL破坏20min后，加氢氧化钠溶液（1.0mol/L）5mL中和；B.加氢氧化钠溶液（1.0 mol/L）5 m L破坏20 min后，加入盐酸溶液（1.0 mol/L）5 mL中和；C.160℃加热2 h破坏；D.紫外光（254、365 nm）照射15 min。分别取上述各破坏产物，转移至50 m L容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得经破坏后的供试品溶液，照“2.1”项下条件进样。由色谱图得出：主峰与降解产物峰分离良好（分离度均大于1.5），表明此法专属性强。见图1。

图1 专属性色谱图

2.4 线性关系

精取对照品储备液1.0、5.0、10.0、20.0mL和25.0mL，分别置50mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，进样20μL。以进样量（μg）为横坐标X，峰面积为纵坐标Y，绘制标准曲线：Y=29 850.56X-6 348.82，r＝0.9999（n=5），表明：盐酸氨溴索进样量在0.060 04~ 1.501 00μg范围内与峰面积有良好的线性关系。

2.5 精密度试验

取对照品溶液连续进样5次，峰面积的RSD为0.3%。表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

取供试品溶液，分别经室温放置0、2、4、8、12 h后，进样，峰面积的RSD为0.4%。表明供试品溶液至少在12 h内稳定。

2.7 重现性试验

取样品（批号：20130227），按“2.2.3”项下制备供试品溶液5份，照“2.1”项下条件测定，测得含量均值为99.6%，RSD=0.3%，表明方法重现性良好。

2.8 加样回收率测定

精取样品（批号：20130227，100.4%）适量（约相当于盐酸氨溴索0.75 mg）9份，分为三组，每组分别精密加入对照品储备液3、5、7 mL（分别约相当于加入盐酸氨溴索的量为0.4503、0.7505、1.0507 mg），按“2.2.3”项下制备成低、中、高3个浓度的供试品溶液（分别为“2.2.3”项下供试品溶液浓度的80%、100%、120%），照“2.1”项下条件测定加样回收率。测定结果见表1。

表1 加样回收率测定结果（n=9）

2.9 样品含量测定

取对照品溶液及三批样品的供试品溶液，按“2.1”项下条件进样测定，按外标法计算，测定结果见表2。

表2 样品测定结果（%）

3 讨论

3.1 检测波长的选择

以流动相为溶剂，用岛津UV-2550型紫外－可见分光光度计测定，盐酸氨溴索最大吸收波长为248 nm，故定为测定波长。

3.2 流动相的选择

实验时曾选甲醇代替流动相中乙腈，但峰型较差，此法的色谱峰型对称（拖尾因子为1.04），理论塔板数较高，符合系统适用性的要求；《中国药典》2010年版二部新增关于流动相的选择原则是：应尽可能少用含有缓冲液的流动相，必须使用时，应尽可能选用含较低浓度缓冲液的流动相，曾用高、低两种磷酸盐浓度：0.01mol/L（《中国药典》2010年版方法）、0.005mol/L（本法）进行比较，色谱峰型无明显差异，故选用较低浓度的磷酸缓冲溶液作为流动相，有利于延长色谱系统的寿命。

3.3 方法专属性

经破坏实验验证，盐酸氨溴索主峰与各降解产物分离良好，能够排除降解产物的干扰，专属性强，可有效地控制盐酸氨溴索注射液的质量。

3.4 方法学考察

本法线性范围较宽，加样回收率高，结果可靠准确，可用于盐酸氨溴索注射液的含量测定。

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Determ ination of Am broxol Hydrochloride Injection by RP-HPLC

LIU Shuhua
Institute for Food and Drug Control of Chaoyang City in Liaoning Province,Chaoyang 122000,China

Objective To establish amethod for the determination of Ambroxol Hydrochloride Injection by RP-HPLC. Methods The determination was performed on a Kromasil C18column(4.6 mm×150 mm,5μm)with themobile phase consisted of 0.005mol/L diammonium phosphate solution(adjusted to pH 7.0 with phosphoric acid)-acetonitrile(48∶52) at ambient temperature.The flow rate was 1.0 mL/min.The detective wavelength was 248 nm.The injection volume was 20μL.Resu lts The liner range of Ambroxol Hydrochloride was 0.060 04-1.501 00μg(r＝0.9999,n=5).The average recovery was 99.4%(RSD=0.6%,n=9)for the three different levels of the added amount of Ambroxol Hydrochloride.Conclusion Thismethod is specific,accurate and reproducible.It can be used for determination of Ambroxol Hydrochloride Injection.

RP-HPLC;Ambroxol Hydrochloride Injection;Contentdetermination

R927.2

A

1673-7210（2014）01（b）-0111-03

2013-11-14本文编辑：卫轲）

刘淑华（1971-），女，副主任药师，从事药品检验工作。