孙秀才,施 霞,曾 辉,孟 娟,盛艳华,冯建章

(1.深圳市第三人民医院心内科,广东深圳518112;2.广东省心血管病研究所心内科)

血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)增殖是动脉粥样硬化、高血压病、支架内再狭窄等多种心血管疾病的共同病理特征。各种生长因子、细胞因子与血管平滑肌细胞表面的受体结合,在细胞内引起一系列复杂的级联反应,致使外界刺激转变为胞内信号并被逐级放大,最终导致DNA合成和细胞的分裂增殖[1-3]。丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)是细胞内多种促细胞增殖信号传递的交汇点和信息的共同通路,在细胞增殖中起关键作用。由内皮素-1(endothelin,ET-1)等许多促VSMCs增殖的有丝分裂刺激都是通过ERK1/2途径起作用[4-5]。姜黄为姜科植物Curcuma longa L的根茎,姜黄素(curcumin)是姜黄的主要有效成分,为天然的酚类抗氧化剂,具有多种分子靶向作用,包括转录因子、生长因子以及受体,细胞活素、酶和基因调控的细胞增殖和凋亡[5-6]。有研究表明[7]姜黄素能抑制血管平滑肌细胞的增殖。为探讨其分子机制,本研究以体外培养的大鼠VSMCs为模型,观察姜黄素对ET-1诱导VSMCs增殖及ERK1/2信号通路的影响。

1 材料与方法

1.1 主要材料

DMEM培养基、胰蛋白酶、胎牛血清购于Gibco公司,内皮素-1、姜黄素购自 Sigma公司,3H-胸苷(放射性比活度28Ci/mmol)中国原子能科学院提供。ERK1/2 Assaykit,NEB公司产品。其他试剂均为国产分析纯。

1.2 VSMCs的原代培养

参照王道生[8]贴块法进行。选用10周龄Wistar kyoto大鼠(中山大学实验动物中心提供)断头处死,取胸主动脉中膜以贴块法培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基中,置于37℃、5%CO2孵箱中培养,1周后可见细胞从组织块边缘爬出,2～3周出现致密细胞层,此时即可传代,传代细胞光镜下呈典型的“峰与谷”样生长,细胞抗β-actin抗体鉴定为血管平滑细胞。……