(南华大学附属第一医院消化内科,湖南衡阳421001)

胃癌是消化道常见恶性肿瘤之一,在我国胃癌呈高发状态,每年新发病例占全国的40%[1]。最近研究发现,转化生长因子-β(Transforming growth factor-beta,TGF-β)家族的分泌紊乱及其传导通路的中断与肿瘤的发生发展关系密切[2]。在人类的TGF-β家族中,主要有 TGF-β1、TGF-β2 和 TGF-β3 三种形式,三者的生物学作用相似,其中TGF-β1含量最高且最具有代表性。TGF-β1为DPC4基因的信号传递蛋白,它通过与其受体,如[转化生长因子-β受体1(Transforming growth factor beta receptor typeⅠ,TGFBR1)]结合能抑制多种细胞的增殖、分化并促进细胞间质的形成。DPC4基因为抑癌基因,其蛋白产物Smad4对恶性肿瘤的发生发展及转移有重要影响。通路中任意原件的异常都可导致紊乱,影响TGF-β1的生物学效应。因此,本研究对胃癌组织中TGFBR1基因的全部外显子进行基因测序,揭示胃癌组织TGFBR1基因的突变位点,将发现的突变位点与TGFBR1的蛋白质结构域进行比对,初步分析突变类型,并了解突变与临床病理因素的关系。

1 材料与方法

1.1 材料

选取南华大学附属第一医院肿瘤外科2012年3～7月胃癌切除标本40例,其中胃癌标本20例,正常胃黏膜组织20例,全部病例术前均未接受化疗或放疗,且病理组织学均为腺癌。取材时,分别取肿块中央部位癌组织及远离癌灶5 cm以上的配对正常组织,在离体30 min内于液氮中速冻30 min,再置于-80℃超低温冰箱中储存待用。经术后切除组织病理检查证实:原发肿块组织均为胃腺癌组织,远离的配对组织均未见肿瘤细胞及不典型增生细胞的正常组织。

1.2 突变位点分析

1.2.1 引物的设计与合成 参照文献[3]设计了TGFBR1基因全部外显子的引物序列,具体见表1,由上海桑尼生物科技有限公司合成。……