王柏琦,陈艳华,蒋丽琴,程爱兰

(1.南华大学附属第二医院肿瘤内科,湖南衡阳421001;2.南华大学肿瘤研究所)

鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma)是我国南方地区最常见的恶性肿瘤之一,EB病毒感染、遗传因素、营养状况、年龄等均与本病的发生存在一定关联[1],但其发病机制目前仍不明了。近年来,DNA甲基化等表观遗传学的改变在肿瘤中的作用日益受到重视[2]。生理条件下,DNA甲基化是维持DNA稳定性以及DNA与蛋白质相互作用所必须[3]。然而DNA异常甲基化也可导致多种癌基因的激活和(或)抑癌基因的失活。其中最常见的抑癌基因包括回复引导半胱氨酸丰富蛋白含kazal基元(Reversion-inducing-cysteine-rich protein with kazal motifs,RECK)、Ras相关区域家族1A(Ras association domain family 1A,RASSF1A)等,这些抑癌基因的失活与鼻咽癌的发生密切相关[4]。近年来研究显示,RECK蛋白可抑制机体基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)的水解从而抑制肿瘤细胞血管发生与转移[4]。

姜黄素是一种二酮类化合物,目前已经研究显示姜黄素对多种肿瘤细胞具有抑制作用[5]。但迄今为止,姜黄素能否影响鼻咽癌细胞中RECK基因的甲基化,目前仍不清楚。本研究拟从姜黄素入手,观察食源性物质能否影响鼻咽癌CNE-1细胞系中RECK基因的表达和甲基化,并观察其是否能影响MMP-9的活性而发挥抗肿瘤作用。

1 材料与方法

1.1 材料

姜黄素(纯度98%)为sigma产品。DNA提取试剂盒购自Qiagen,核蛋白提取试剂盒购自Pierce。抗MMP-9多克隆抗体购自Santa Cruz,HPR标记羊抗鼠IgG抗体购自北京中杉金桥生物有限公司。EpiQuik DNMT活性检测试剂盒购自Epigentek公司。其他分析纯产品主要购自上海生工生物工程公司。

1.2 细胞培养与MTT实验

CNE-1鼻咽癌细胞系购于ATCC,用含有10%FBS和1%青霉素、链霉素的RPMI-1640培养基培养基中,于37℃、5%CO2培养箱中培养24 h。……