罗方利，郭力，贝圆，许莉

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延龄草鞣质的含量测定

罗方利，郭力，贝圆，许莉

目的：建立延龄草中鞣质的含量测定方法。方法：以磷钼钨酸法作为显色方法，采用紫外-可见分光光度法进行测定。结果：在0.0755～0.2012mg范围内吸光度与鞣质含量呈良好的线性关系(r2=0.9991，n=9)，平均回收率为100.10 %，RSD= 2.51%，n=9。结论：该法精密度、重现性良好，可作为延龄草中鞣质的含量测定方法。

延龄草；鞣质；含量测定

头顶一颗珠系百合科延龄草属植物头顶一颗珠(Trillium tschonoskii Maxim.)的干燥根状茎及根，其味甘性温，有小毒，有止血、解毒、接骨续筋等功效，主治头痛眩晕、跌打损伤、神经衰弱、疔疮肿毒等[1]。传统医学认为，含鞣质的中草药具有收敛、止血、止泻的作用[2,3]。现代药理研究表明，鞣质具有抗脂过氧化、抗肿瘤、抗病毒、抑菌、抗炎、抗过敏、解毒、生发、增强肾功能等方面的作用[4]。目前，对延龄草植物中皂苷类成分研究较多，但未见延龄草中鞣质的相应报道，本实验参照2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅩB鞣质含量测定方法，对延龄草中鞣质含量进行了检测。以期为延龄草药材的规范化和进一步的开发利用提供科

1 仪器与试药

紫外-可见分光光度仪（UV-1100，上海天美科学仪器有限公司），Sartorius系列电子分析天平，KQ3200E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），优普系列超纯水器（成都超纯科技有限公司）等。

没食子酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号：110831-200302，供含量测定用) ;实验所用试剂均为分析纯，延龄草药材来自四川省南江县，经成都中医药大学中药鉴定教研室李敏教授鉴定确认为百合科延龄草属植物延龄草( Trillium tschonoskii Maxim.)的干燥根茎。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品5.03 mg，置100 mL 棕色容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，得浓度为0.0503mg/mL的对照品溶液。

2.1.2 磷钼钨酸试液的制备 取钨酸钠100g、钼酸钠25g，加水700mL使溶解，加盐酸100mL、磷酸50mL，加热回流10h，放冷，再加硫酸锂150g、水50mL和溴0.5mL，煮沸除去残余的溴（约15分钟），除去残留的溴，冷却，加水稀释到 1000 mL，过滤，收集滤液即得。

2.1.3 供试品溶液的制备 取延龄草药材0.5 g，精密称定，置25 mL棕色量瓶中，加入纯水15 mL，放置过夜，超声处理10分钟，放冷，加水稀释至刻度，摇匀，静置，滤过，即得。

2.2 最大吸收波长的确定

分别取对照品溶液和供试品溶液适量，置25mL棕色量瓶中，加入磷钼钨酸试液1mL，再分别加水至溶液总量为12mL，再用29%碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30分钟，以相应的试剂为空白，在400nm～800nm范围内进行全波长扫描，没食子酸对照品溶液和供试品溶液的最大吸收波长均在760nm处，故确定其为测定波长。

2.3 标准曲线的绘制

精密量取没食子酸对照品溶液1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0mL，分别置25mL棕色量瓶中，各精密加入磷钼钨酸试液1mL，再分别加水补足12mL，用29%碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30分钟，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在761nm波长处测定吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。进行线性回归，得回归方程：Y=3.8171X-0.0500，r2=0.9991，表明没食子酸在0.0755～0.2012mg范围内线性关系良好。

2.4 测定方法

2.4.1 总酚的测定 取上述供试品溶液0.5 mL，置25 mL棕色量瓶中，照“2.3”项下方法，自“加入磷钼钨酸试液1mL”起，依法测定，计算含量，即得。

2.4.2 不被吸附多酚的测定 取上述供试品溶液1 mL，加至盛有0.6 g干酪素的具塞锥形瓶中，密塞，置30 ℃水浴中保温1小时，时时振摇，取出，放冷，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1.2 mL，置25 mL棕色量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入磷钨酸试液1ml”起，依法测定吸光度，计算，即得。

总酚量减去不被吸附的多酚量，即得鞣质含量。

2.5 精密度试验

精密吸取同一没食子酸对照品溶液，按“2.3”项下方法连续测定其吸光度A，重复5次，RSD为0.73%，表明该测定方法精密度良好。

2.6 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液，按“2.3”项下方法分别于0、30、60、90、120min，测定其吸光度，RSD=1.18%，结果表明供试品溶液在2 h内稳定。

2.7 重复性试验

分别称取同一批延龄草样品5份，每份约1g，按“2.1.3”项下方法制备，按“2.3”项下方法测定吸光度。总酚RSD=0.75%，不被吸附多酚RSD=1.20%，表明该测定方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

精密称取已知含量的延龄草粉末0.5 g（9份），分别精密加入1.01mg/mL的没食子酸对照品0.7，0.85，1mL，按“2.1.3”项下方法制备样品溶液。按照“2.3”项下方法测定吸光度，计算回收率为100.10%，RSD=2.51%，结果见表1。

表1 没食子酸加样回收率试验结果表

2.9 样品含量测定

按照“2.1.3”项下操作方法，制备5批供试品溶液，按“2.3”项下方法测定吸光度，结果见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨论

鞣质的含量测定方法主要有比色法、高锰酸钾法、皮粉法、干酪素法、络合滴定法、分光光度法等。本实验采用的磷钼钨酸-干酪素比色法具有灵敏、快速、操作简便、成本低廉、方便实用、精密度高、专属性强等特点[5]。

磷钼钨酸-干酪素法的原理为：在碱性溶液中，酚类化合物可以将钨钼酸还原(使W6+变为W5+)，生成蓝色的化合物，颜色的深浅与酚含量呈正相关，且在760nm处有最大吸收。以干酪素作为鞣质吸附剂，进而消除样品中其它含多酚羟基成分的干扰，可以选择性地吸附有生理活性的鞣质，因此测出的是有疗效的鞣质，而无疗效的鞣质如鞣酐等则不被测定[6,7]。本方法中，鞣质含有的多酚羟基与磷钼钨酸试液反应生成的蓝色产物遇光不稳定，强光照射会使显色体系吸光度下降，因此显色反应应该避光操作，使用棕色容器。延龄草中鞣质的含量测定对其质量控制具有参考价值，延龄草中鞣质与其传统功效的相关性有待进一步研究。

[1] 谢宗万等.全国中草药汇编[M].上册.第二版.北京:人民卫生出版社, 2000: 225.

[2] 陈佳江,郭力,许莉.叠鞘石斛与药典收载石斛品种鞣质含量对比研究[J].中国实验方剂学杂志,2013,19(2):64.

[3] 王宗伟.植物鞣质的药理作用及结构特征.国外医学.中医中药分册,1997,19(2):22.

[4] 栗世婷,张晓霞. 鞣质药理活性的研究新进展[J].疾病监测与控制杂志,2010,4(7):395.

[5] 刘若霞,郭巧玲,田素英.金樱茎鞣质的含量测定[J].现代中药研究与实践,2011,25(6):73.

[6] 张燕,张洪斌,胡海强,等.磨盘草不同部位中鞣质含量测定[J].中国中医药信息杂志,2010,17(3):53.

[7] 朱琼,包贝华,曹雨诞.鸡冠花炭饮片中鞣质的含量测定[J].南京中医药大学学报,2010,26(1):62.

（责任编辑: 胡慧玲）

Content determination of tannin in Trillium tschonoskii Maxim.

LUO Fang-li, GUO Li, BEI Yuan, XU Li//(Pharmacy College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine; State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources, Chengdu 611137, China)

Objective:To establish a method for the content determination of tannin in Trillium tschonoskii Maxim.Method:The content of tannin in Trillium tschonoskii Maxim. was detected by molybdophosphate colorimetric method.Result:The absorbance with the tannin was linear within the range of 0.0755 mg ～ 0.2012 mg(r2=0.9991，n=9). The average recovery was 100.10% and RSD was 2.51% (n=9).Conclusion:This method can be used for the quality control of Trillium tschonoskii Maxim. with good precision and reproducibility.

Trillium tschonoskii Maxim.; tannin; content determination

R 282.6

A

1674-926X(2014)01-003-02

成都中医药大学药学院 中药材标准化教育部重点实验室 中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地，四川 成都 611137

罗方利，硕士在读，主要从事中药有效成分分析研究 Email:870905012@qq.com

郭力，教授，博士生导师，主要从事中药药效物质基础及质量标准化研究 Email:gli64@sina.com

2013-06-08学依据。