常艳波

（四川省食品药品检验检测院，四川成都611731）

HPLC法测定盐酸舍曲林片的有关物质

常艳波

（四川省食品药品检验检测院，四川成都611731）

目的建立高效液相色谱法检测盐酸舍曲林片中有关物质的方法。方法采用Waters Symmetry C18色谱柱，以含有磷酸、磷酸二氢钾溶液和乙腈的不同比例的混合液为流动相进行梯度洗脱，流速为1.0 mL·min－1，检测波长为210 nm，柱温为25℃，进样量为20μL。结果有关物质与盐酸舍曲林主成分色谱峰分离良好。结论该方法操作简便、重复性好、专属性强，可作为盐酸舍曲林片质量控制方法。

盐酸舍曲林；高效液相色谱法；有关物质

盐酸舍曲林（sertraline hydrochloride），化学名为（1S－顺式）－4－（3，4－二氯苯基）－1，2，3，4－四氢－N－甲基－1－萘胺盐酸盐，是一种5－羟色胺再摄取抑制剂，主要用于治疗或预防抑郁症与强迫症。目前，对于盐酸舍曲林有关物质的报道为数不多［1～9］，如毛细管电泳法［7］、加压毛细管电色谱法［8］等，主要为盐酸舍曲林异构体的分离测定，本文主要考察了盐酸舍曲林的工艺杂质，参考英国药典，采用反相高效液相色谱（RP－HPLC）法分离盐酸舍曲林片中的2种已知杂质及其他未知杂质，对其进行质量控制，从而为盐酸舍曲林片的质量控制提供依据。

1 仪器与试药

Waters 2695系列高效液相色谱仪，包括Waters 2489紫外检测器，Empower2色谱工作站。盐酸舍曲林对照品（中检所，批号：100702－200401）；杂质C对照品（EP－7.0，批号：120828）；杂质E对照品（Ep－7.0，批号：Y0001285）；盐酸舍曲林片（厂家A批号：1272017；厂家B批号：130201、130202、130203）。磷酸二氢钾、磷酸为分析纯；乙腈为色谱纯；水为纯化水。

2 方法

2.1 色谱条件 色谱柱：Waters Symmetry C18（4.6mm ×250mm，5μm）；柱温：25℃；流速：1.0mL·min－1；检测波长：210 nm。进样量：20μL。流动相A：0.272%磷酸二氢钾溶液，用磷酸调节pH值至3.0；流动相B：乙腈，梯度洗脱程序见表1。

表1 梯度洗脱程序表

2.2 溶液的制备

2.2.1 系统适用性试验溶液 取盐酸舍曲林对照品和杂质C对照品适量，用乙腈－水（3∶7）溶解并稀释制成含盐酸舍曲林2.5 mg·mL－1、杂质C 20 μg·mL－1的混合溶液，作为系统适用性试验溶液。

2.2.2 供试品溶液 取盐酸舍曲林片9片，置200 mL量瓶中，加乙腈－水（3∶7）150 mL，振摇使完全崩散，超声处理5 min，加上述溶剂稀释至刻度，摇匀，制成含盐酸舍曲林2.5mg·mL－1的溶液，滤过，取续滤液（前5 mL滤液弃去），作为供试品溶液。

2.2.3 对照品溶液 精密量取供试品溶液1 mL，置500 mL量瓶中，加乙腈－水（3∶7）稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液（1）；精密量取对照溶液（1）5 mL，置10 mL量瓶中，加上述溶剂稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液（2）；另精密称取杂质E适量，用乙腈－水（3∶7）溶解并稀释制成10μg·mL－1的溶液，作为对照品溶液。

3 实验结果

3.1 系统适用性试验结果 取系统适用性试验溶液20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，杂质C的出峰时间应为12～17 min，盐酸舍曲林应在30 min内出峰，盐酸舍曲林峰和杂质C峰的分离度不得小于1.5，结果见图1。

图1 盐酸舍曲林片系统适用性试验溶液HPLC色谱图1.杂质C；2.盐酸舍曲林

3.2 杂质限度标准的制订 供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，与杂质C保留时间一致的杂质峰面积不得大于对照溶液（1）主峰面积的4倍（0.8%），与杂质E保留时间一致的杂质峰面积不得大于对照品溶液主峰面积（0.4%），其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积（0.2%），总杂质（除杂质C峰外）不得大于对照溶液（1）主峰面积的7.5倍（1.5%）。小于对照溶液（2）主峰面积的杂质峰不计（0.1%）。

3.3 检测限定量限 精密称取杂质C、杂质E对照品适量，加乙腈－水（3∶7）制成对照品溶液，通过逐级稀释，精密量取20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。信噪比（S／N）约为10时的进样量即为定量限，信噪比（S／N）约为3时的进样量即为检测限。

结果表明：杂质C与杂质E的检测限分别为1.30、0.70 ng；定量限分别为3.92、2.10 ng。当供试品溶液中盐酸舍曲林浓度为2.5 mg·mL－1、进样量为20μL时，其绝对进样量为50 000 ng，该进样量约为杂质C检测限的38 000倍，即约0.003%的杂质量可被检出；是杂质E检测限的70 000倍，即约0.002%的杂质量可被检出，远低于杂质限度要求，该方法灵敏度高，能充分保证有效检出样品中杂质。

3.4 专属性试验 取盐酸舍曲林片9片及盐酸舍曲林原料约500 mg分别进行酸、碱、氧化、高温、光照破坏实验，同时取辅料、未破坏供试品及原料按照上述色谱条件进行实验。结果表明经酸、碱、氧化、高温、强光条件破坏的样品，在选择的色谱条件下，样品主峰、已知杂质和强降解产物均能有效分离，表明本方法能够有效的检查盐酸舍曲林片中的有关物质。破坏性试验图谱见图2～7。

图2 辅料空白

图3 酸破坏原料

图4 碱破坏原料

3.5 精密度试验 精密量取杂质C，杂质E对照品溶液及“2.2”项下对照溶液（1）各20μL，注入液相色谱仪，分别连续进样6次，记录色谱图，考察精密度，结果各溶液色谱图中主峰面积RSD（n＝6）分别为0.13%、0.19%、0.28%，表明试验精密度良好。

图5 氧破坏原料

图6 高温破坏原料

图7 光破坏原料

3.6 线性关系 分别取杂质C、杂质E对照品适量，分别用乙腈－水（3∶7）溶解并逐级稀释制成浓度系列溶液，精密量取各溶液20μL，分别注入液相色谱仪，按照上述色谱条件检测，记录色谱图，以峰面积对浓度线性回归，试验结果表明，杂质C在0.980 0～39.20μg·mL－1范围内，线性关系良好；杂质E在1.05～21.04μg·mL－1范围内，线性关系良好。

3.7 稳定性试验 取杂质C，杂质E对照品溶液及“2.2”项下供试品溶液、对照溶液（1）室温放置（20～25℃，遮光），按上述色谱条件，分别于0、1、2、4、8 h进行检测，考察稳定性，结果表明，上述各测定溶液在室温条件放置（20～25℃，遮光）8 h，杂质含量无变化，稳定性良好。

3.8 重复性试验 取盐酸舍曲林片供试品（130201），按照上述方法平行制备6份供试品溶液，分别进行有关物质检测。结果表明，6份供试品溶液已知杂质含量、未知杂质含量和总杂质含量结果均无显著差异（RSD≤1.0%），杂质个数一致，重复性良好。

3.9 耐用性试验 按上述色谱条件，在其他条件不变的情况下，分别将流速改变为（1.0±0.1）mL·min－1，柱温在20～35℃范围内改变，更换Waters Symmtry C18（4.6 mm×250 mm，5μm），Kromasil C18（4.6 mm ×250 mm，5μm），Chromsil ODS2（4.6 mm×250 mm，5μm）对取供试品溶液，进行考察，结果显示，在上述流速和柱温的条件下，结果均能满足系统适用性要求，但仅Waters Symmtry C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）能满足系统适用性要求。

3.10 样品有关物质检查 取盐酸舍曲林片（市售，厂家A批号：1272017；厂家B批号：130201、130202、130203）样品，按照上述有关物质检查方法检查，结果见表2。

表2 样品的有关物质检查结果

4 讨论

4.1 专属性试验结果表明氧化、光照条件对杂质C影响较大，其余条件影响相对较小。

4.2 耐用性试验 本文采用3种色谱柱，对供试品溶液进行了考察，结果仅Waters Symmtry C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）能满足系统适用性要求，原因为该方法系统适用性对杂质和主成分的出峰时间及之间的分离度有明确且较严格的要求，故在拟定该方法时必须规定色谱柱为Waters Symmtry C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）。

4.4 方法的优化 英国药典（BP2013）中舍曲林片有关物质检查项下规定，系统适用性溶液色谱图每次均需与BP参考图谱比对，要求“基本一致”，而中国药典及中检院的对照品均不提供参考图谱，且BP杂质对照品价格昂贵、购买不易，给实际操作带来不便，故本研究根据BP参考图谱对系统适用性试验的要求，对方法进行了优化：取盐酸舍曲林对照品和杂质C对照品适量，用溶剂A溶解并稀释制成含盐酸舍曲林2.5 mg·mL－1、含杂质C 20μg·mL－1的混合溶液，作为系统适用性试验溶液，杂质C的出峰时间应为12～17 min，盐酸舍曲林应在30 min内出峰，盐酸舍曲林峰和杂质C峰的分离度不得小于1.5。

①盐酸舍曲林与杂质C的浓度：按照供试品溶液浓度及杂质C限度（不得大于0.8%）配制系统适用性溶液，结果该溶液的色谱图中，盐酸舍曲林峰与杂质C峰的保留时间，杂质C的峰响应值与BP参考图谱中相应峰基本一致。

②盐酸舍曲林峰的保留时间：流动相系统在0～30 min为高极性的等度洗脱，使杂质及主成分有效分离，自30min起有机相的比例升高，使低极性的杂质得以洗脱，主成分盐酸舍曲林在30min内出峰，保证了其他杂质在50min的梯度洗脱中被有效检出。

③杂质C的保留时间：BP参照图谱中杂质C的出峰时间约为14 min，为了保证系统适用性试验与BP的一致性，结合耐用性试验结果，将杂质C的保留时间定为12～17 min。

④分离度：为保证盐酸舍曲林峰和杂质C峰有效分离，规定二者的离度不得小于1.5。

结果表明，优化后的系统适用性试验与原BP方法无明显差异，为保证检查的准确和简便。

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Determ ination of related substances of Sertraline Hydrochloride Tablets by HPLC

CHANG Yan-bo
（Sichuan Institute for Food and Drug Control，Chengdu 611731，China）

ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of the related substances of Sertraline Hydrochloride Tablets.M ethodsA gradient elution was carried out on a Waters Symmetry C18column with mixture of phosphoric acid and potassium dihydrogen phosphate solution and acetonitrile asmobile phase，and the flow ratewas1.0 mL ·min－1.The detection wavelength was 210 nm，the column temperature was 25℃，and the injection volume was 20μL.Resu ltsThe relevant substances were well separated from the chief agent.ConclusionThe method was simple，repeatable and specific，and can be used for the quality control of Sertraline Hydrochloride Tablets.

Sertraline hydrochloride；HPLC；Related substances

R927.11

A

2095－5375（2014）10－0578－004

常艳波，硕士，主管药师，研究方向：药品质量控制，E－mail：chang.y.b＠163.com