段生庆，李东江，张家华，赵其毅，欧积能，邵庆勇

（1．云南省龙陵县畜牧工作站，龙陵 678300；2．云南省畜牧兽医科学院，昆明 650224）

FSH不同注射方式对龙陵黄山羊超数排卵效果的影响

段生庆1，李东江2，张家华1，赵其毅1，欧积能1，邵庆勇2

（1．云南省龙陵县畜牧工作站，龙陵 678300；2．云南省畜牧兽医科学院，昆明 650224）

使用美国产FSH，采用减量和等量2种注射方式分别对8只龙陵黄山羊进行超排。结果表明：减量注射组的排卵数、回收总数、可用胚胎数分别为14.88个±3.87个、13.25枚±4.83枚、12.63枚± 5.37枚，等量注射组排卵数、回收总数、可用胚胎数分别为10.38个±3.46个、9.25枚±2.31枚、8.75枚±2.12枚，减量注射组的排卵数、回收总数均显著高于等量注射组（P<0.05）；两组间卵巢上卵泡数、回收率、可用胚胎数、回收胚胎可用率均无显著差异（P>0.05）。

FSH；超数排卵；龙陵黄山羊

超数排卵后获得胚胎是开展种质（胚胎）资源保存的基础。山羊超数排卵常用外源促性腺激素为FSH（促卵泡素），尽管FSH用于牛羊超数排卵已广泛使用多年，但山羊超数排卵还存在许多问题，如激素来源、注射剂量、注射方式、注射部位、超排程序均会影响其超数排卵效果。龙陵黄山羊是在云南省保山市龙陵县特殊的自然环境下，经过长期的自然选择和人工选择形成的皮肉兼用型地方优良品种，具有耐热耐湿，耐粗放饲养管理，体格大，生长快，繁殖率高，易育肥，屠宰率高、膻味轻，肌肉纤维嫩等特点。为开展龙陵黄山羊胚胎冷冻保存，本试验用美国产FSH采用不同注射方式对龙陵黄山羊进行超数排卵处理，研究减量注射和等量注射对龙陵黄山羊超数排卵效果的影响。

1 材料与方法

1.1 羊只

超数排卵用羊为饲养在云南省保山市龙陵县乌木山龙陵黄山羊繁育基地的16只经产龙陵黄山羊，年龄2周岁，体重接近，随机分为A、B两组，每组8只。公羊为12只龙陵黄山羊成年公羊。

1.2 时间

2013年7 —8月进行超数排卵处理、胚胎回收和胚胎冷冻保存。

1.3 主要试剂和仪器

前列腺素（PG）：0.2 mg/支，上海市计划生育研究所生产；孕激素（P）：又叫孕酮，做成硅胶栓（CIDR），每个CIDR含孕激素0.3 g，新西兰产；垂体促卵泡素（FSH）：美国SIOUX生物化学公司生产，每瓶50 IU，批号3088，使用时用20 mL 0.9%生理盐水稀释，每只羊注射总量10 mL（25 IU）；Vade注射液：西乡长江动物药品有限责任公司生产；胚胎回收液（PBS液）：美国Sigma公司生产；胚胎保存液（Holding液）：美国Bioniche公司生产；体视显微镜：SZX10型，日本Olympus公司生产。

1.4 超数排卵处理

龙陵黄山羊为“放牧+补饲”饲养方式，为确保试验羊只空怀，埋栓处理前30 d母羊统一注射PG 0.2 mg，注射PG后强化饲养管理。30 d后用“P+FSH”法对16只龙陵黄山羊进行超数排卵处理，即在发情周期中的任意一天埋植第一个CIDR硅胶栓并肌注Vade 5 mL，第一次埋栓当天计算为超排程序的第0天，第8天更换新的CIDR硅胶栓，从第14天开始A组采用减量注射法在4 d内肌注FSH 10 mL（2次/d，间隔12 h，每次注射量详见表1），B组采用等量注射法在4 d内肌注FSH 10 mL（2次/d，间隔12 h，每次注射1.25 mL）。在第7次注射FSH时撤栓并肌注Vade 5 mL，撤栓后24 h发情，母羊发情后用公羊本交配种，早晚各配种一次，直至母羊不发情。超数排卵FSH注射流程详见表1。

表1 龙陵黄山羊超数排卵FSH注射流程mL

1.5 胚胎回收

于发情后的第7天回收胚胎，手术前空腹24 h，注射

麻醉后保定于专用手术架，创口刮毛、消毒处理并覆盖创巾，采用手术法于腹部乳房下2～4 cm处腹中线部位切口，拉出两侧子宫和卵巢，统计卵巢上黄体数量（黄体数等于排卵数），用专用胚胎回收管从子宫角处回收发育到桑椹胚至囊胚期的胚胎，胚胎回收至直径90 mm培养皿中。

1.6 检胚及胚胎质量鉴定

用口吸管在显微镜下从培养皿中找出胚胎，按胚胎形态、透明带完整性、内细胞团结构对胚胎进行质量鉴定后，采样常规慢速冷冻法冷冻胚胎，冻后胚胎置于液氮罐中长期保存。

1.7 数据统计和分析

统计排卵数、卵泡数、回收总数、回收率、可用胚胎数、可用胚率，采用t检验对试验数据进行分析。

2 结果与分析

16只龙陵黄山羊经超数排卵处理后全部发情，超排反应率100%。统计试验组间排卵和胚胎回收效果，结果显示：减量注射组的排卵数、回收总数均显著高于等量注射组（P<0.05）；两试验组间卵巢上卵泡数、回收率、可用胚胎数、回收胚胎可用率均无显著差异（P>0.05）。结果详见表2。

表2 不同方式注射FSH对龙陵黄山羊超排及胚胎回收效果的影响

4 小结与讨论

山羊卵巢上卵泡的生长发育是一个极其复杂的动态过程，从原始卵泡库的建立到优势卵泡的进一步发育至排卵或闭锁退化，经历了募集、选择、优势化以及成熟排卵/闭锁等一系列连续的过程，受各种因子通过内分泌、旁分泌、自分泌等多种途径的严密调控［1］。FSH和LH是主导卵泡发育的两个主要因素，地方品种山羊垂体自然分泌的FSH只能保证1～3个卵泡发育成熟，在发情前期给母羊注射大量的外源FSH就能诱导大量卵泡发育成熟，在LH的协同作用下排出超过正常排卵数若干倍的卵子［2］。本试验使用的美国产FSH中含有一定量的LH，所以在母羊发情后未单独注射LH，减量注射组第一天注射FSH的量为2.0 mL，而等量注射组为1.25 mL，第一次注射高剂量FSH能诱发卵巢上更多的原始卵泡募集，在高剂量FSH的持续作用下，卵巢上更多的卵泡发育成优势卵泡至排卵；减量注射组在后期FSH注射量小于等量注射组，但排卵数依然较高，是因为当原始卵泡生长至有腔卵泡后，对FSH的依赖程度降低所致。

本试验结果显示：在肉羊超数排卵过程中，采用减量注射法注射FSH可获得较好的排卵和胚胎回收效果。

［1］吴延光，于元松，谭景和．哺乳动物卵泡发育模式及其调控机理［J］.动物学杂志，2002，37（6）：83-87．

［2］邵庆勇，成文敏，李卫娟，等.山羊活体采卵的理论基础［J］.中国草食动物，2007，27（6）：57-59.

《中国草食动物科学》双月刊

《中国草食动物科学》是由中华人民共和国农业部主管、中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所主办的国家级科技核心期刊。于2012年4月由《中国草食动物》更名而成。《中国草食动物科学》为美国《化学文摘》（CA）收录期刊，中国科技核心期刊，中国农业核心期刊，RCCSE中国核心（扩展板）学术期刊；是中国科学引文数据库（CSCD）、中国科技论文与引文数据库、中国学术期刊综合评价数据库（CAJCED）和中国生物学文献数据库统计源期刊。

《中国草食动物科学》在原《中国草食动物》的基础上，立足西部，充分利用研究所的区位优势，提高期刊核心竞争力，建立适应市场经济体制的与国际接轨的全新办刊理念，及时、准确地反映草食动物科技进步的方向，增强在国内外同行中的影响力和竞争力，更好地满足广大科研、教学与畜牧生产者的需求，服务我国节粮型动物养殖和畜牧业发展。

《中国草食动物科学》主要刊登牛、羊、马、骆驼、鹿、兔、鸭、鹅、驼鸟、鱼等各种节粮型草食动物的最新科研成果和科技成就。主要栏目：遗传育种，繁殖与生理，营养与饲料，草地与牧草，疾病防控，专论与综述。

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2095-3887（2014）02-0072-02

10.3969/j.issn.2095-3887.2014.02.024

2013-11-27

国家现代肉羊产业技术体系（CARS-39）

段生庆（1969-），男，畜牧师。

邵庆勇（1975-），男，研究员。