疆岳驴精液浓缩效果的观察

2014-02-27祁宏业

兽医导刊 2014年8期

关键词：母驴稀释液输精

祁宏业

（柯坪县畜牧兽医站，新疆柯坪 843600）

疆岳驴精液浓缩效果的观察

祁宏业

（柯坪县畜牧兽医站，新疆柯坪 843600）

疆岳驴是新疆通过长期杂交选育而成的一个优良的地方品种，常常作为种驴，为新疆驴育种起到了积极作用。由于社会进步和农村经济的快速发展，驴群的数量和质量面临逐渐降低的趋势。根据疆岳驴的品种现状和当前养驴业的的实际现状，还需努力提高驴的的质量和数量，加强保种工作。为此，我们进行了新疆岳驴的精液浓缩效果的观察试验，为疆岳驴冷冻精液的理论研究和推广应用提供依据。现将浓缩试验的方法和结果，报告如下：

1 精液的采集

为防止精液污染，除器械彻底消毒外，采精场地用3%的来苏儿水喷洒消毒，待5～10min进行采精，种公驴的阴茎用2%的小苏打溶液洗净擦干，用常规法采集种公驴精液，活力不能低于0.7级以下。为了使精子不受低温的打击，集精杯应放在电热恒温水浴锅内，温度保持38～40℃。

1.1 精液选择

在普通光学显微镜下镜检新鲜精液的质量，密度中等以上、活力达到0. 7以上的精液留下作试验用。精子密度检查，估测法：取一滴原精液，制成平板压片，放在400倍显微镜下观察，按密、中、稀三级评定。“密”：精子充满整个视野，精子音质空隙难以容纳1个精子，看不清单个精子运动，密度在10亿以上/ml。“中”：精子间的空隙能容纳1～2个精子，能看清单个精子的运动，密度为3～9亿/ml。“稀”：精子在显微镜下分布较松散，精子间的空隙能容纳3～9个精子，密谋评定为1～3亿。

1.2 精液浓缩方法

驴精液稀释前，将合格者立即进行1∶1倍等温稀释，稀释后再次检查精子活力。由于精液包含精子和精清，精清中的电解质成分会促进精子早衰，所以稀释后马上对精液进行离心浓缩处理，离心的转速和时间精子的活力影响很大，离心轻，精清内含有大量活精子被弃掉；离心重，沉积精子板结，难以分离，使大最精子伤亡。理想的标准：沉降的精子在管底与精清界线分明，轻摇稍有移动，不粘结成块，精清部分呈云雾状徐徐下降。由于个体驴精液的副性腺液含量不同、密度不同，气温的变化，室温的高低，离心机的型号及电压不稳等因素都影响离心效果。基本要求∶离心转速不超过2000 r/min，时间不超过20 min，离心温度20～25℃效果较好。

2 最佳离心速度的选择

将符合条件的精液等分。先用相同离心时间、相同卵黄浓度的条件处理6个组和一个对照组。处理方法见下表

相同离心时间下精液的处理方法

再将用相同转速，相同卵黄浓度的条件处理6个组。最后用相同转速、离心时间的条件下处理6个组。

将离心后的精液，弃8～10ml上清，并按1∶1的比例与等温稀释液混合，轻摇，常温保存的精液放在避光处定间距观察。低温保存的精液，定时观察。各处理组从第0h起每8h观察一次精子活力并记录数据。

3 稀释液的配制

精液冷冻稀释的配方很多，主要成分为糖类、卵黄、盐类。实践证明，糖-卵黄-甘氨酸-青链霉素稀释液效果好。我们用的稀释液是离心稀释液，用分析纯蔗糖6.5g明胶加入蒸馏水100ml用中速滤纸过滤后，煮沸消毒3～5min，冷却后待用。张世杰曾制作过关中驴冷冻精液，他只选用青霉素作为抗生素，效果良好。王希平，王力波等在也曾研究过马驴精液的低温贮存，他们的配方是，蒸馏水100 ml、柠檬酸钠1.4 g、葡萄糖3.0 g、卵黄液20 mL、青霉素10 IU、链霉素0.1 g。还使用了新鲜乳汁（牛、马）100 mL，青霉素10IU、链霉素0.1g。

4 精液浓缩方法

实验结果表明：1500r/min的条件下，最好的离心时间在10～15min只间，可以在最短的时间获得最大的精子回收率（表3）。通过考虑回收率和精子活率两者，运用1500r/min，10～15min离心精液可以得到比较好的结果[12]；1974年，易理辉等将驴精液在30℃下1500 r/min离心10min进行浓缩处理，以后的浓缩大多沿用了这一离心速度[3]，这与易理辉等（1974）的研究结果不相符，所以还需进一步研究。在实际的人工授精的生产中精子的活率在30%才可以得到较好的受胎率，因此，用此种方法处理的精液保存有效时间大约为48h。母驴的发情期长3～8d，如果在排卵前12h输精，才有可能得到较为满意的效果，因此，为了确保受孕母驴需要在一个情期多次输精，因此人工授精和精液的保存显得非常必要。

用不同的转速对精液进行离心，在离心后立即对精液品质进行检查，发现离心对精子活力的影响不大。但在经过保存后发现离心速度越快，精子存活时间越短[13]。这说明，高离心速度可能对精子产生显微结构上的损伤，只有在3000r/min以上，才能立即造成精子的死亡。

用不同的时间相同离心速度1000r/min对精液进行离心，离心后用精子记数器计算精子密度，用剩余的精子数量与总精子数相比较，来计算精子回收率。

在精液的保存过程中，微生物会在精液中生长。驴人工授精一次输入的活精子数应在2亿左右，驴精液的精子密度相对较底，因此人工授精时需要在子宫内注入精液。但是液体越多，液体中所含的微生物越多，这样增加了母驴患子宫内膜炎的风险。浓缩精子，增大精子密度，有利于减少人工输精时输入子宫的精液体积，减少子宫内膜炎的发病率。