毛君婷姜玲玲史开志

（1.贵阳市花溪区农业局，贵州贵阳 550025；2.贵州省畜牧兽医研究所，贵州贵阳 550005）

规模化猪场致病性仔猪黄白痢大肠杆菌耐药性检测

毛君婷1姜玲玲2史开志2

（1.贵阳市花溪区农业局，贵州贵阳 550025；2.贵州省畜牧兽医研究所，贵州贵阳 550005）

为揭示规模化猪场致病性仔猪黄白痢大肠杆菌的耐药性，为生猪养殖选择用药提供借鉴，2012年至2014年期间，通过细菌分离鉴定，从贵州省贵阳市21家发生仔猪黄白痢的规模化猪场分离得到21株致病性仔猪黄白痢大肠杆菌。药物敏感性检测结果表明，分离细菌不同比例地对14种兽医常用抗生素表现耐药性，链霉素和氨苄青霉素耐药性最为严重；头孢噻呋钠和氟苯尼考是较为敏感的抗生素药物，但随着时间推移，头孢噻呋钠和氟苯尼考的敏感菌株比例在逐步下降。

规模化猪场；仔猪黄白痢；致病性大肠杆菌；耐药性

致病性大肠杆菌是仔猪黄白痢的病原，在生猪养殖中严重威胁和危害新生和哺乳仔猪，可导致仔猪群体性腹泻和死亡，是仔猪生产过程中重点防治的疫病[1]。由于该菌血清类型众多，不同地区甚至相同地区不同养殖场之间优势血清型常各不相同，而不同血清型之间不存在明显的交叉保护，疫苗免疫通常不能获得理想的防控效果，长期以来主要依赖抗生素预防和治疗仔猪黄白痢[2]。

虽然抗生素的大量使用在防控仔猪黄白痢的过程中曾取得重大功效，但抗生素的选择压力同时导致了耐药菌株的不断涌现，为这一疾病的防控带来了新的困扰和挑战[3]。为揭示规模化猪场致病性仔猪黄白痢大肠杆菌耐药动态，笔者对2012年至2014年期间贵州省贵阳市21个发生仔猪黄白痢的规模化猪场进行致病性大肠杆菌分离鉴定，并通过药物敏感性试验对21株分离的病原菌耐药性进行检测，为规模化猪场利用抗生素有效应对仔猪黄白痢提供参考和借鉴。

1 材料与方法

1.1 试验材料

营养琼脂培养基、伊红美蓝培养基和麦康凯培养基为北京奥博星生物技术有限公司产品；大肠杆菌生化鉴定管及药敏片购自杭州微生物试剂有限公司，氟苯尼考和头孢噻呋钠（药敏片自制）为成都中牧生物药业有限公司产品；试验小白鼠购至贵阳医学院实验动物中心；大肠杆菌质控菌株ATCC25922购自中国兽医药品监察所。

1.2 致病性菌株分离鉴定

用灭菌直肠拭纸无菌操作采集发生黄痢或白痢的仔猪肛门样本，接种麦康凯培养基、伊红美蓝培养基进行大肠杆菌分离纯化，通过革兰氏染色镜检进行形态学鉴定，根据大肠杆菌生化特征进行生化特性鉴定、通过小白鼠接种试验进行分离细菌致病性鉴定。

1.3 分离致病性大肠杆菌耐药性检测

利用大肠杆菌标准菌株ATCC25922进行质控，按照世界卫生组织（WHO）推荐的K-B法，对分离得到的致病性大肠杆菌进行药敏试验，抗生素种类及判断标准见表1。

表1 药敏片名称及敏感性判断标准

1.4 不同年度流行菌株耐药性比较

根据分离细菌流行年限对其进行划分，比较不同年度流行菌株对同一种抗生素的耐药比例变化。

2 结果与分析

2.1 致病性仔猪黄白痢大肠杆菌分离鉴定

通过细菌分离纯化、革兰氏染色镜检、生化图谱鉴定和小白鼠接种试验，从21个发生仔猪黄白痢的规模化生猪养殖中，共分离到33株大肠杆菌，其中12株大肠杆菌接种小白鼠后无致病性，分别分离自12家猪场；21株大肠杆菌为致病性菌株，来自21个不同猪场。从分离年限看，2012年分离8株、2013年分离9株、2014年分离4株。

2.2 分离致病菌耐药性测试

通过药敏试验，对21株分离致病菌进行耐药性检测，结果见表2。

表2 分离致病菌耐药性检测

从表2可见，在14种兽医常用抗生素中，分离菌株出现不同程度的耐药，其中链霉素耐药最为严重，共有16株病原菌出现耐药性；耐药性最为轻微的是头孢噻呋钠，仅4株耐药。没有发现一种抗生素对所有分离菌株均表现敏感。

2.3 不同时间分离菌株耐药性比较

将分离菌株按流行时间分类，比较不同年度流行菌株耐药比例变化，发现变化最大的抗生素为头孢噻呋钠，在2012年分离的8株致病菌中，仅有1株细菌耐药，2013年分离的9株细菌中，2株出现耐药，2014年分离的4株中，1株细菌出现耐药；其次是氟苯尼考2012年，8株分离菌中，耐药菌株仅2株，2013年，检测的9株细菌中，4株耐药，2014年，4株流行菌株中2株耐药。其它12种抗生素，各年流行菌株中耐药菌株比例变化并不明显。

3 讨论

2012年至2014年期间，从贵州省贵阳市21家发生仔猪黄白痢的猪场分离到致病性仔猪黄白痢大肠杆菌21株，利用14种生猪养殖中常用的抗生素，测定分离菌株的药物敏感性，发现分离菌株出现不同程度耐药。

致病菌耐药性的出现，给仔猪黄白痢的药物防控带了了困难。从试验检测的结果看，分离菌株中，大部分菌株出现严重的多重耐药，这可能是近年来养殖场仔猪黄白痢药物预防和治疗效果较差的原因。针对耐药细菌的出现，猪场应针对性地选择敏感抗生素进行仔猪黄白痢的的预防和治疗，从而保证治疗效果和节约用药成本。从对21株致病性大肠杆菌的药物敏感性检测结果看，头孢噻呋钠是最理想的仔猪黄白痢预防和治疗用药；其次是氟苯尼考和头孢噻肟；四环素、多西环素、阿米卡星和多粘菌素有一定的预防和治疗可能，但比例敏感细菌比较低；其它的药物敏感性很低，特别是氨苄青霉素和链霉素，从药敏试验结果看，已不适于仔猪黄白痢的预防和治疗。

细菌随在抗生素的选择压力下，其耐药谱会发生变化。通过对不同年度分离病原菌耐药性进行比较，发现在2012年属于比较敏感的头孢噻呋钠和氟苯尼考，在2013和2014年具有耐药性的菌株比例已经大幅上升。这可能是因为在2012年和2013年中，因为上诉2种抗生素比较敏感，治疗效果较好，因此猪场大量使用，从而导致了抗头孢噻呋钠和抗氟苯尼考的病原菌比例的上升。针对这一现象，规模化猪场在选择抗生素预防和治疗仔猪黄白痢时，不应该长期只依靠少数几种抗生素，应定期筛选敏感药物并适度交替使用，尽量缩短耐药菌株出现的时间。

[1] 蔡宝祥.家畜传染病学（第四版）[M].北京：中国农业出版社，2001.

[2] 王秀梅，蒋红霞，廖晓萍，等.猪源致病性大肠杆菌的血清型、毒力基因及抗菌药耐药性的调查[J].中国农业科学，2010，43（19）：4109-4115.

[3] 汤景元，王红宁，张鹏举，等.95个猪场大肠杆菌耐药表型及氨基糖苷类药物耐药基因型调查[J].畜牧兽医学报，2008，39（4）：472-477.

毛君婷（1985-），女， 重庆铜梁人，硕士，主要从事畜牧兽医技术推广，通讯作者：史开志。

贵州省现代农业（生猪）产业体系疫病防制功能实验室建设（GZCYTX2013-0902）；贵州省科技厅农业攻关项目（黔科合NY[2013]3072）；贵阳市科技特派员计划项目（筑科合同[2011207]27号）；贵州省科技厅改革转制项目（黔科合体Z字[2012]4004号）。