郝志云，杨新周，林惠昆，罗 雯

（1.德宏师范高等专科学校，理工系；云南 德宏 678400；

2.云南民族大学化学与生物技术学院；云南 昆明 650031）

微波法萃取田基黄中总黄酮

郝志云1，杨新周1，林惠昆1，罗 雯2

（1.德宏师范高等专科学校，理工系；云南 德宏 678400；

2.云南民族大学化学与生物技术学院；云南 昆明 650031）

以田基黄为原料，对微波法提取田基黄中总黄酮的工艺进行了研究，确定了最优工艺参数：微波提取时间5 min，提取次数1，提取温度50℃，提取溶剂为60%乙醇，料液比为1∶35／（g／mL）。最佳条件下，田基黄中的总黄酮提取率为14.24%。

微波萃取法；黄酮；田基黄

目前国内外提取中草药黄酮类物质的方法已有许多报道，主要有索氏提取法［1］、超声波提取法［2］、回流法［3］、微波法［4］等。其中微波法节省溶剂、加热时间短、快速、高效。中草药中黄酮类化合物有着很多的药理学作用［5］，本文以微波提取法提取田基黄中总黄酮，并测定其含量，为田基黄药材质量控制和进一步研究提供参考。

1 材料与仪器

田基黄（采购于腾冲）；芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）；无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠，均为分析纯；实验用水为超纯水。

WFZ UV－2000型紫外分光光度计（上海尤尼柯仪器有限公司）；EXCEL微波快速消解仪（上海屹尧仪器科技发展有限公司）；WL－200高速中药粉碎机（瑞安市威力制药机械厂）；EPED－20TH实验超纯水器（南京易普易达科技有限公司）。

1.2 样品预处理

样品用自来水洗净，蒸馏水洗2～3次，再用超纯水洗净，置于烘箱中60～65℃烘干，取出后粉碎，过100目（0.150 mm）筛，将筛好的粉末置于密封袋中备用。

2 试验方法

2.1 总黄酮的测定方法

采用NaNO2－Al（NO3）3－NaOH法测定总黄酮。取适量的样品液于25 mL的容量瓶中，加30%的乙醇10.00 mL及5%的NaNO2溶液1.00 mL摇匀，静置6 min，加10%的Al（NO3）3溶液1.00 mL摇匀，静置6 min，加1 mol／L的NaOH溶液10.00 mL摇匀，加水稀释至刻度，摇匀，静置15 min，以试剂为空白，于最大吸收波长处进行测定［6］。

2.2 标准曲线的绘制

2.2.1 标准液的制备

准确称取120℃干燥恒重的芦丁0.05 g（精确至0.0001 g）用60%微热乙醇定容至50 mL摇匀，得质量浓度为1.00 mg／mL的标准液。

2.2.2 最大吸收波长的确定

准确取1.00 mL芦丁标准液，用“2.1”的方法测定其在400～600 nm波长范围内的吸光度，得芦丁储备液在500 nm处有最大吸收，即确定最大吸收波长为500 nm。以下试验均在500 nm波长处进行。

2.2.3 芦丁标准曲线的绘制

分别准确取0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.20、1.40、1.60 mL芦丁标准储备液于9个25 mL的容量瓶中（质量浓度分别为0、8、16、24、32、48、56、64 μg／mL），用“2.1”的方法于500 nm波长处测定吸光度。以芦丁质量浓度（μg／mL）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。曲线方程为A＝0.012 5C＋0.003 2（式中：A为吸光度；C为芦丁标准液的质量浓度（μg／mL）），相关系数r＝0.999 9。

2.3 总黄酮含量的测定

准确称取0.200 0 g田基黄样品于萃取罐中，加入适量的乙醇后置于微波消解仪中按预定的条件萃取，萃取结束用0.45 μm滤膜过滤，定容至50 mL，得样品液。准确移取2.00 mL样品液于25 mL的容量瓶中，用“2.1”的方法测定其吸光度。根据线性回归方程计算可得提取液总黄酮质量浓度（μg／mL），然后按下式计算得总黄酮提取率（%）。

总黄酮提取率／%＝（C×稀释倍数×V／W）×100%

C为根据测得的吸光度值带入线性回归方程所得的提取液总黄酮质量浓度，μg／mL；V为抽滤样品后的定容体积，mL；W为称取样品的质量，g。

3 结果与讨论

3.1 微波提取次数对总黄酮提取率的影响

称取0.2 g田基黄样品于萃取罐中，设定微波提取温度为50℃，乙醇体积分数30%，微波萃取7 min，料液比1∶30，分别提取1、2、3次，测定黄酮的提取率，实验结果如表1。

表1 微波提取次数对总黄酮提取率的影响Table 1 Influence of microwave extraction times on extraction rate of flavonoids

从表1看出，单独提取1次的提取率为11.07%，连续提取2次的提取率为13.27%，连续提取3次的提取率为13.87%。连续提取对总黄酮提取率的提高影响不大。因此以下试验均提取1次。

3.2 料液比对田基黄总黄酮提取率的影响

称取0.2 g田基黄样品于萃取罐中，加入一定体积的30%乙醇溶液，分别使料液比为1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35、1∶40 g／mL，设定微波提取温度为50℃，微波萃取7 min，提取1次，测定黄酮的提取率。实验结果如图1。

从图1中看出，当料液比为1∶35时黄酮的提取率最高，所以选择最佳料液比为1∶35。

图1 料液比对黄酮提取率的影响Figure 1 Impact of solid－liquid ratio on the extraction rate of flavonoids

3.3 乙醇体积分数对田基黄总黄酮提取率的影响

称取0.2 g田基黄样品于萃取罐中，按照料液比为1∶35，分别加入体积分数为30%、40%、50%、60%、70%、80%的乙醇溶液，微波提取温度为50℃，萃取7 min，测定黄酮的提取率。实验结果见图2。

图2 乙醇体积分数对黄酮提取率的影响Figure 2 The effect of ethanol volume fraction on the extraction rate of flavonoids

从图2中看出，当乙醇体积分数为60%时，黄酮的提取率最大，所以选择提取溶剂为60%的乙醇。

3.4 微波提取时间对田基黄总黄酮提取率的影响

设定提取温度50℃，料液比1∶35，乙醇体积分数60%，分别提取2、5、7、10、12 min，然后测定黄酮含量。实验结果如图3。

图3 微波时间对黄酮提取率的影响Figure 3 The effect of microwave time on the extraction rate of flavonoids

从图3中看出，微波提取时间在2～5 min之间提取率升高，当微波时间提取大于5 min时，提取率下降，所以选择微波提取时间为5 min。

3.5 温度对田基黄总黄酮提取率的影响

选择料液比1∶35，乙醇体积分数60%，按照提取温度40、50、60、65、70、75、80℃进行提取，测定黄酮含量。实验结果如图4。

从图4中可以看出，当提取温度在40～60℃时提取率逐渐升高，当温度在60～80℃时，提取率逐渐减小，且当提取温度为60℃，黄酮提取率达到最大，所以选择提取温度为60℃。

3.6 验证实验

准确平行称取0.200 0 g田基黄样品3份，按照试验最优条件，测定田基黄的总黄酮含量并计算提取率，3次测定结果提取率分别为14.24%、14.29%、14.31%，田基黄黄酮平均提取率为14.28%。

图4 温度对黄酮提取率的影响Figure 4 The effect of temeperature on the extraction rate of flavonoids

4 结论

微波提取田基黄中总黄酮含量并计算其提取率。最佳提取工艺为料液比1∶35 g／mL，溶剂乙醇的体积分数为60%，萃取时间5 min，萃取温度60℃，提取1次。田基黄黄酮平均提取率为14.28%。

［1］刘金娜，温春秀，杨太新，等.瓜蒌子黄酮提取方法和参数优化的研究［J］.时珍国医国药，2013，24（9）：2088－2090.

［2］林娜，尹礼国，董媛媛.硬头黄竹叶黄酮提取工艺优化［J］.江苏农业科学，2012，40（1）：240－241.

［3］李光，余霜，邓银，等.金荞麦中黄酮提取技术研究［J］.江苏农业科学，2013，41（7）：264－266.

［4］张艳军，彭重威，徐淑庆，等.银叶树树叶中总黄酮提取工艺优化［J］.中药材，2012，35（4）：638－640.

［5］万明，宋永钢，杨菠.黄酮类化合物的药理作用及其在食品工业中的应用［J］.江西食品工业，2007（3）：47－49.

［6］钟佳，马金晶，罗雯，等.大叶羊蹄甲总黄酮的提取及其对羟自由基的清除作用研究［J］.中国农学通报，2012，28（16）：215－218.

Extracting of Total Flavonoids from Grangea maderaspatana Using the Technique of Microwave

HAO Zhi－yun1，YANG Xin－zhou1，LIN Hui－kun1，LUO Wen2

（1.Dehong Teachers college，Science and Engineering Department，Dehong 678400，China；2.School of Chemistry and Biotechnology，Yunnan Nationalities University，Kunming 650031，China）

The method of microwave extraction technology of Total Flavonoids in Grangea maderaspatana was researched.The optimum technology parameters are as follows：extraction time was 9 min，ethanol concentration was 60%，extraction temperature was 50℃，extracted 1 times，and the liquid and solids ratio was 1∶35（g／mL）.Under the optimum extraction conditions determination of total flavonoids from Grangea maderaspatana.The results showed that total flavonoids of Grangea maderaspatana were 142.38 mg／g.Microwave extraction technology is an efficient，rapid and environmental method for extracting total flavonoids from the Chinese Medicinal Herbs.

microwave extraction；total flavonoids content；Grange maderaspatans

O657.3

A

1004-275X（2014）05-0008-03

12.3969／j.issn.1004-275X.2014.05.003

收稿：2014-04-18

德宏师范高等专科学校校级科学研究课题（编号：DSK201303）。

郝志云（1962-），男，副教授，主要研究方向：分析化学及化学教育。