林 牧，刘光明，蒋锡超，李云静，马志敏

（1.大理学院基础医学院，云南大理 671000；2.大理学院农学与生物科学学院，云南大理 671003；3.大理学院药学与化学学院，云南大理 671000；4.大理学院公共卫生学院，云南大理 671000；5.南华大学公共卫生学院，湖南衡阳 421001）

蚕豆根尖微核试验研究云南松松塔球提取物抑突变性

林 牧1，刘光明3，蒋锡超4，李云静5，马志敏2*

（1.大理学院基础医学院，云南大理 671000；2.大理学院农学与生物科学学院，云南大理 671003；3.大理学院药学与化学学院，云南大理 671000；4.大理学院公共卫生学院，云南大理 671000；5.南华大学公共卫生学院，湖南衡阳 421001）

目的：探讨云南松松塔球提取物的抑突变作用。方法：分别将大理邓川和湾桥产的蚕豆随机分为4组，经实验处理后，采用蚕豆根尖微核技术对蚕豆根尖细胞微核数进行检测，考察松塔球提取物对蚕豆根尖细胞微核率的影响情况。结果：松塔球提取物I对邓川产蚕豆根尖细胞微核的产生有抑制作用，抑制率达50%，且对环磷酰胺诱导的蚕豆根尖微核有明显的抑制作用，抑制率为62.5%。松塔球提取物I对湾桥产蚕豆根尖细胞微核的产生有抑制作用，抑制率达50%，且对环磷酰胺诱导的蚕豆根尖细胞微核有明显的抑制作用，抑制率为50%。结论：松塔球提取物可有效抑制环磷酰胺诱导的蚕豆根尖微核的产生，具有抑突变性，从而说明松塔球提取物对肿瘤的防治可能具有积极的作用。

松塔球提取物；抑突变性；蚕豆根尖微核技术

随着肿瘤发病率的上升，肿瘤的预防和治疗一直是国内外专家学者的重要课题。松塔，又称松塔球，系松科（Pinaceae）松属（Pinus）植物红松、马尾松、华山松、油松等的球果，可入药，具有很大的开发潜力〔1〕。现代研究表明，松塔中还含有抑菌消炎、抗病毒及抗肿瘤等作用的化学成分〔2〕。微核（micro⁃nuclei，MN）是真核类生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生的〔3〕。微核的形成与肿瘤的发生有一定的联系。微核是恶变的先兆，在癌细胞和临床症状之前出现〔4〕。目前，用于检测外源物质致突变效应的方法较多，本文利用蚕豆根尖细胞对致癌物和抗癌物都很敏感的特性，使用蚕豆微核试验来探讨松塔球提取物对环磷酰胺诱发微核的影响，进一步研究松塔球提取物的抑突变作用。

1 材料与方法

1.1实验材料

1.1.1 蚕豆（Vicia faba L.） 大理市邓川镇和湾桥镇两地生产的蚕豆。

1.1.2 试剂 云南松（P.yunanensis Fr.）的松塔球碱性提取物I（黑色膏状物，含木脂素、二萜类等混合物，由大理学院药学与化学学院刘光明教授提供），经研磨后，称取5 mg溶于500 mL的3%乙醇溶液中，配制成1%的云南松提取物I溶液，于4℃保存备用。20 mg∕mL环磷酰胺（CP）；5N HCl溶液；卡诺氏液；Schiff试剂；SO2洗涤液。

1.1.3 仪器 电热恒温培养箱；显微镜；恒温水浴箱等。

1.2实验方法

1.2.1 分组 将蚕豆随机分成4组：1组为阳性对照组（环磷酰胺处理组），2组为阴性对照组（蒸馏水处理组），3组为松塔球提取物I处理组，4组为松塔球提取物I+CP处理组。

1.2.2 实验步骤 对蚕豆进行浸泡24 h，25℃温箱内催芽20 h，在初生根长至2～3 mm时，选取发芽良好的种子继续催芽40 h，至种子大部分初生根长至2～3 cm，选择根毛发育良好的种子进行给药处理。分别在1组中加入10 mL的环磷酰胺、2组中加入10 mL的蒸馏水、3组中加入1%松塔球提取物I液10 mL、4组中加入1%的松塔球提取物I液和20 mg∕mL的环磷酰胺各10 mL的混合液，各处理蚕豆根尖20 h。然后按常规方法对处理过的蚕豆根尖细胞进行固定、染色、制片、镜检。每组分别观察4个根尖，每个根尖观察4 000个细胞，得出微核数，计算微核率（MCN‰）和微核抑制率（IR%）。IR1%为云南松松塔球提取物对蚕豆根尖微核产生抑制率，IR2%为云南松松塔球提取物对CP诱发的蚕豆根尖微核产生抑制率。

MCN‰=（测试样品观察到的微核细胞数∕测试样品观察到的细胞数）×1000‰

IR1%=［（阴性对照组微核细胞数-提取物I组微核细胞数）∕阴性对照组微核细胞数］×100%

IR2%=［（阳性对照组微核细胞数-提取物I+CP组微核细胞数）∕阳性对照组微核细胞数］×100%

1.2.3 统计学处理 实验数据使用统计软件SPSS16.0进行统计处理。

2 结果

云南松松塔球提取物I对CP诱发的蚕豆根尖微核率的影响。见表1。

表1 云南松松塔球提取物对CP诱发的蚕豆根尖微核率的影响

由表1可见，不论是邓川产蚕豆，还是湾桥产蚕豆，环磷酰胺阳性对照组的微核率与阴性对照组微核率比较，差异具有统计学意义（P<0.05）。提取物I组和提取物I+CP组分别与阴性对照组和阳性对照组之间的微核率比较，差异具有统计学意义（P<0.05）。松塔球提取物I对邓川和湾桥产的蚕豆根尖细胞微核的产生抑制率均为50%，对CP诱导的两地产的蚕豆根尖细胞微核产生抑制率分别为62.5%和50%。

3 讨论

松塔中含有萜类、木质素类、多糖等多种化学成分，其中一些化学组分具有抗肿瘤、抗病毒、抗菌等重要生物活性，可以作为一种新型抗肿瘤药物〔5〕。云南松松塔中含有某些抗HIV的活性成分，这些成分的提取物可以研制成价格低廉的抗HIV药物〔6〕；另外的成分如木质素、木质素-糖复合物、草莽酸及黄酮等均可以作为一种新的资源加以开发利用〔7-9〕；其碱性提取物D对肿瘤的防治可能具有积极的作用〔10〕。张志琴等〔11〕通过对云南松松塔中活性成分采用TLC及HPLC进行了定性、定量研究，建立了松塔药材的质量控制标准，为制定松塔的质量控制标准、开发新药提供参考。目前云南松松塔球提取物制成高效的抗肿瘤药物制剂还在进一步研究中。

本实验结果说明云南松松塔球提取物对环磷酰胺诱发的蚕豆根尖细胞微核率有显著抑制作用，提示云南松松塔球提取物可能具有抗肿瘤作用，但尚需进行动物实验。

〔1〕杨鑫，邱建伟，张华，等.松属植物化学成分及生物活性的研究进展〔J〕.中药材，2007，30（7）：878.

〔2〕SAKAGAMI H，KAWAZOE Y，KOMATSU N，et al.Anti⁃tumor，antiviral and immunopotentiating activities of pine cone extracts：potential medicinal efficacy of natural and synthetic lignin-related materials〔J〕.Anticancer Res，1991，11（2）：881-888.

〔3〕周勇义，郭启华.抗癌药物研究动态简介〔J〕.化学教育，2004，25（5）：10-13.

〔4〕叶幼珠.谈谈我国抗癌药物发展趋势〔J〕.海峡药学，1995，3（7）：63-64.

〔5〕吕小满，胡艳芬，刘光明，等.松塔化学成分及生物活性的研究进展〔J〕.医学综述，2010，16（7）：1071-1073.

〔6〕杜峰涛，李林.细胞微核形成机理探讨〔J〕.现在检验医学杂志，2007，22（4）：19-23.

〔7〕曹佳，林真.微核试验：原理、方法及其在人群监测和毒性评价中的应用〔M〕.北京：军事医学科学出版社，2000：12-15.

〔8〕夏从龙，周浓，刘光明，等.云南松中莽草酸含量的高效液相色谱法测定〔J〕.时珍国医国药，2010，21（7）：1607-1609.

〔9〕施贵荣，马慧敏，邓应飞，等.思茅松不同部位莽草酸含量的HPLC测定〔J〕.中国实验方剂学杂志，2013，14（10）：109-111.

〔10〕昌思思，马志敏，刘光明，等.松塔球提取物的抑突变性研究〔J〕.癌变畸变突变，2009，22（1）：59-61.

〔11〕张志琴，刘光明，杨永寿，等.云南松松塔药材质量标准〔J〕.中国实验方剂学杂志，2013，19（13）：68-71.

*通信作者：马志敏，教授.

（责任编辑 毛本勇）

Anti mutagenicity of Extracts of the Yunnan Pinecones by Vicia-Micronucleus Test

LIN Mu1,LIU Guangming3,JIANG Xichao4,LI Yunjing5,MA Zhimin2*
（1.Pre-clinical College,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China；2.College of Agriculture and Biology Science,Dali University, Dali,Yunnan 671003,China；3.College of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China；4.College of Public Health,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China；5.School of Public Health,University of South China,Hengyang,Hunan 421001,China）

Objective:To investigate the anti-mutagenicity of the extracts of Yunnan pincones.Methods:Horsebeans from Dengchuan village and Wanqiao village were divided into 4 groups randomly.After the pretreatment,vicia-micronucleus test was applied to explore the anti-mutagenicity of the extracts of pinecones.Results:The extract I of Yunnan pinecone showed 50% inhibition on the Dengchuan fava beans-induced micronucleus,62.5%inhibition on cyclophosphamide-induced micronucleus and 50%inhibition on Wanqiao fava beans root-induced micronucleus.Conclusion:Yunnan pinecone extract effectively inhibited viciamicronucleus induced by cyclophosphamide solution and showed anti-mutagenicity.Thus the extracts of pinecones may have positive effect on tumor prevention.

pinecones extract;anti-mutagenicity;Vica-micronucleus test

B849

A

1672-2345（2014）02-0055-03

10.3969∕j.issn.1672-2345.2014.02.015

2013-09-26

2013-12-19

林牧，硕士研究生，主要从事病毒感染与免疫研究.