颜朦朦，肖世基，，陈 放，周 燕*

1中国科学院成都生物研究所;2 四川大学生命科学学院，成都 610064

近年来，由于金丝桃属植物的提取物显示出了良好的抗抑郁和抗病毒活性而受到人们的注意［1］。因此为了寻找该属植物中具有新颖结构及良好抗抑郁或抗病毒活性的化合物，我们对采自四川的黄海棠(Hypericum ascyron L.)植物进行了系统的分离纯化和结构鉴定。

黄海棠为藤黄科(Guttiferae)金丝桃属多年生草本植物，高0.5～1.3 m。除新疆和青海外，全国各地均产［2］。黄海棠又名红旱莲、长柱金丝桃，具有抗菌消炎、收敛止血的作用［3］。为了系统的阐明该种植物的化学成分，运用了反相硅胶柱层析、葡聚糖凝胶LH-20 及薄层制备等分离方法，从该种植物中分离得到15 个化合物，并运用MS 和NMR 波谱解析技术确定了它们的结构。

1 仪器及材料

Finnigan LCQDECA型质谱仪;Bruker AV-600 和Bruker Ascend 400 型核磁共振仪，TMS 为内标;北京创新通恒LC3000 型高效液相色谱仪，HPLC 柱为Daisogel C1810 μ 100A 30 ×250 mm;薄层色谱硅胶GF254和柱色谱硅胶(100～200，200～300 目)均为青岛海洋化工厂生产;MCI 树脂为Mitsubishi Chemical 公司生产;Sephadex LH-20 为Merck 公司产品。

黄海棠于2012年8 月采自四川，经成都生物研究所蒋研究员鉴定为金丝桃属植物黄海棠Hypericum ascyron L.。

2 提取与分离

黄海棠茎叶干重1 kg 粉碎后用丙酮浸泡提取3次，减压浓缩得浸膏80 g。丙酮浸膏经硅胶柱色谱(石油醚-丙酮梯度洗脱)分为7 个部分。第一部分Fr.1 经硅胶柱分离(氯仿-甲醇50∶1～10∶1)得到化合物6 (40 mg)、化合物15 (20 mg)和Fr.1.1。Fr.1.1 经凝胶柱Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1 ∶1洗脱)分离得到化合物9 (4 mg)。第二部分Fr.2析出黄色粉末，经重结晶得化合物2 (80 mg)。母液经ODS 柱色谱(甲醇-水70∶30→100∶0)分离为3 个部分(Fr.2.1-3)，Fr.2.2 经RP-HPLC 分离得到化合物2 (5 mg)、3 (20 mg)、10 (12 mg)和11 (8 mg)。第三部分Fr.3 经ODS 柱色谱(甲醇-水70∶30→100∶0)分离为3 个部分(Fr.3.1-3)，Fr.3.1经MCI 柱色谱(甲醇-水90∶10 洗脱)脱色之后经凝胶柱SephadexLH-20 (氯仿-甲醇1∶1 洗脱)分离得到化合物1 (3 mg)，Fr.3.2 经凝胶柱Sephadex-LH-20 (氯仿-甲醇1∶1 洗脱)分为3 个部分(Fr.3.2.1-3)，Fr.3.2.2 析出化合物8 (50 mg)，Fr.3.2.3经凝胶柱SephadexLH-20 (氯仿-甲醇1∶1 洗脱)分离得到化合物13 (3 mg)。第四部分Fr.4 经凝胶柱SephadexLH-20 (氯仿-甲醇1∶1 洗脱)分离得到4个部(Fr.4.1-4)，Fr.4.4 经RP-HPLC 分离得到化合物14 (3 mg)。第五部分Fr.5 经MCI 柱色谱(甲醇-水90∶10 洗脱)脱色之后经凝胶柱SephadexLH-20 (氯仿-甲醇1∶1 洗脱)分离为5 个部分(Fr.5.1-5)，Fr.5.3 经RP-HPLC 分离得到化合物7 (11 mg)、8 (8 mg)和12 (15 mg)。第六部分Fr.6 经硅胶柱色谱分离得到4 个部分(Fr.6.1-4)，Fr.6.3经，RP-HPLC 分离得到化合物5 (5 mg)和4 (9 mg)。

3 结构鉴定

化合物1 浅黄色粉末(C40H42O12);1H NMR(DMSO-d6，600 MHz)δ:6.66 (1H，s，H-2)，6.65(1H，d，J=8.3 Hz，H-5)，6.54 (1H，d，J=8.3 Hz，H-6)，2.74 (1H，dd，J=13.6，6.0 Hz，H-7a)，2.56(1H，dd，J=13.6，6.0 Hz，H-7b)，2.19 (1H，m，H-8)，4.26 (1H，dd，J=11.2，6.5 Hz，H-9a)，4.07(1H，dd，J=11.2，5.6 Hz，H-9b)，6.46 (1H，d，J=15.6 Hz，H-11)，7.52 (1H，d，J=15.6 Hz，H-12)，7.28 (1H，br.s，H-14)，6.78 (1H，d，J=8.3 Hz，H-17)，7.09 (1H，d，J=8.3 Hz，H-18)，3.67 (3H，s，OCH3)，3.80 (3H，s，OCH3);13C NMR (DMSOd6，150 MHz)δ:131.3 (C-1)，113.3 (C-2)，147.9(C-3)，145.1 (C-4)，114.9 (C-5)，121.5 (C-6)，34.3 (C-7)，40.2(C-8)，64.3 (C-9)，167.1 (C-10)，115.7 (C-11)，145.5 (C-12)，126.0 (C-13)，111.7 (C-14)，148.4 (C-15)，149.8 (C-16)，116.0(C-17)，123.6 (C-18)，55.8 (OCH3)，56.2(OCH3);ESI-MS m/z 737［M+Na］+，713［M-H］-。以上核磁数据与文献［4］中报道的9，9'-O-di-(E)-feruloyl-(-)-secoisolariciresinol 的核磁数据吻合，因此确定该化合物为9，9'-O-di-(E)-feruloyl-(-)-secoisolariciresinol。

化合物2 黄色粉末(C15H10O6);1H NMR(DMSO-d6，600 MHz)δ:12.61 (1H，s，5-OH)，10.75 (1H，s，7-OH)，10.07 (1H，s，4'-OH)，9.35(1H，s，3-OH)，8.04 (2H，d，J=8.8 Hz，H-2，6')，6.93 (2H，d，J=8.8 Hz，H-3'，5')，6.44 (1H，d，J=1.9 Hz，H-8)，6.19 (1H，d，J=1.9 Hz，H-6);ESI-MS m/z 285［M-H］-。以上核磁数据与文献［5］中报道的山奈酚(kaempferol)的核磁数据基本一致，因此确定该化合物为山奈酚(kaempferol)。

化合物3 黄色粉末(C15H10O7);1H NMR(DMSO-d6，600 MHz)δ:12.48 (1H，s，5-OH)，10.76 (1H，s，7-OH)，9.56 (1H，s，3'-OH)，9.32(1H，s，3-OH)，9.28 (1H，s，4'-OH)，7.67 (1H，d，J=1.5 Hz，H-2')，7.54 (1H，dd，J=8.5，1.5 Hz，H-6')，6.88 (1H，J=8.5 Hz，H-5')，6.40 (1H，s，H-8)，6.18 (1H，s，H-6);ESI-MS m/z 301［M-H］-。以上核磁数据与文献［5］中报道的槲皮素(quercetin)的核磁数据基本一致，因此确定该化合物为槲皮素(quercetin)。

化合物4 黄色粉末(C21H20O12);1H NMR(DMSO-d6，600 MHz)δ:12.63 (1H，s，5-OH)，7.66(1H，dd，J=7.8，1.8 Hz，H-6')，7.53 (1H，d，J=1.8 Hz，H-2')，6.85 (1H，d，J=7.8 Hz，H-5')，6.40 (1H，d，J=1.2 Hz，H-8)，6.20 (1H，d，J=1.2 Hz，H-6)，5.37 (1H，d，J=7.2 Hz，H-1”)，3.61～3.06 (6H，m);ESI-MS m/z 487［M +Na］+，463［M-H］-，300 ［M-164］-。以上核磁数据与文献［6］中报道的金丝桃苷(hyperoside)的核磁数据基本一致，因此确定该化合物为金丝桃苷(hyperoside)。

化合物5 黄色粉末(C21H20O12);1H NMR(DMSO-d6，600 MHz)δ:12.63 (1H，s，5-OH)，7.57(2H，m，H-2'，6')，6.85 (1H，d，J=7.8 Hz，H-5')，6.40 (1H，d，J=1.2 Hz，H-8)，6.20 (1H，d，J=1.2 Hz，H-6)，5.45 (1H，d，J=7.2 Hz，H-1”)，3.61～3.06 (6H，m);ESI-MS m/z 487［M +Na］+，463［M-H］-，300 ［M-164］-。以上核磁数据与文献［6］中报道的槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(quercetin-3-O-β-D-glucopyranoside)的核磁数据基本一致，因此确定该化合物为槲皮素-3-O-β-D 吡喃葡萄糖苷(quercetin-3-O-β-D-glucopyranoside)。

化合物6 黄色粉末(C21H20O11);1H NMR(DMSO-d6，600 MHz)δ:12.61 (1H，s，5-OH)，8.07(2H，d，J=8.8 Hz，H-2'，6')，6.86 (2H，d，J=8.8 Hz，H-3'，5')，6.43 (1H，d，J=1.9 Hz，H-8)，6.21 (1H，d，J=1.9 Hz，H-6)，5.40 (1H，d，J=7.7 Hz，H-1″)，5.14 (1H，d，J=4.7 Hz，OH)，4.82(1H，d，J=5.4 Hz，OH)，4.47 (1H，d，J=4.0 Hz，OH)，4.42 (1H，t，J=5.6 Hz，OH)，3.30～3.66 (6H，m).13C NMR (DMSO-d6，150 MHz)δ:156.4 (C-2)，133.2 (C-3)，177.5 (C-4)，161.2 (C-5)，98.7 (C-6)，164.1 (C-7)，93.6 (C-8)，156.4(C-9)，103.9 (C-10)，120.8 (C-1')，130.9 (C-2'，6')，115.0 (C-3'，5')，159.9 (C-4')，101.7 (C-1″)，71.2 (C-2″)，73.1 (C-3″)，67.8 (C-4″)，75.8 (C-5″)，60.2 (C-6″);ESI-MS m/z 471 ［M +Na］+，447［M-H］-。以上核磁数据与文献［7］中报道的山奈酚-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷(kaempferol-3-O-β-D-galactopyranoside)的核磁数据基本一致，因此确定该化合物为山奈酚-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷(kaempferol-3-O-β-D-galactopyranoside)。

化合物7 黄色粉末(C21H20O11));1H NMR(DMSO-d6，600 MHz)δ:12.61 (1H，s，5-OH)，8.04(2H，d，J=8.8 Hz，H-2'，6')，6.88 (2H，d，J=8.8 Hz，H-3'，5')，6.43 (1H，d，J=1.9 Hz，H-8)，6.21 (1H，d，J=1.9 Hz，H-6)，5.46 (1H，d，J=7.7 Hz，H-1″)，5.31 (1H，d，J=4.7 Hz，OH)，5.02(1H，d，J=4.8 Hz，OH)，4.91 (1H，d，J=4.0 Hz，OH)，4.23 (1H，t，J=5.6 Hz，OH)，3.08～3.60 (6H，m);ESI-MS m/z 471 ［M+Na］+，447［M-H］-。以上核磁数据与文献［8］中报道的山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside)的核磁数据基本一致，因此确定该化合物为山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside)。

化合物8 苍白色粉末(C7H6O4);1H NMR(DMSO-d6，600 MHz)δ:9.71 (1H，s，OH)，9.32(1H，s，OH)，7.33 (1H，d，J=1.7 Hz，H-2)，7.28(1H，dd，J=8.2，1.7 Hz，H-6)，6.78 (1H，d，J=8.2 Hz，H-5);ESI-MS m/z 153 ［M-H］-。以上核磁数据与文献［9］中报道的原儿茶酸(protocatechuic acid)的核磁数据基本一致，因此确定该化合物为原儿茶酸(protocatechuic acid)。

化合物9 黄色粉末(C13H8O4);1H NMR (DMSO-d6，600 MHz)δ:12.5 (1H，s，1-OH)，7.66 (1H，t，J=8.2 Hz，H-3)，7.50 (1H，d，J=9.0 Hz，H-5)，7.40 (1H，d，J=2.7 Hz，H-8)，7.33 (1H，dd，J=9.0，2.7 Hz，H-6)，7.00 (1H，d，J=8.2 Hz，H-4)，6.74 (1H，d，J=8.2 Hz，H-2);ESI-MS m/z 227［M-H］-。以上核磁数据与文献［10］中报道的1，7-二羟基-9-氧杂蒽酮(1.7-dihydroxyxanthone)的核磁数据基本一致，因此确定该化合物为1，7-二羟基-9-氧杂蒽酮(1.7-dihydroxyxanthone)。

化合物10 白色针状晶体(C9H8O3);1H NMR(Acetone-d5，600 MHz)δ:7.59 (1H，d，J=15.9 Hz，H-β)，7.52 (2H，d，J=8.6 Hz，H-2，6)，6.88(2H，d，J=8.6 Hz，H-3，5)，6.31 (1H，d，J=15.9 Hz，H-α);ESI-MS m/z 163［M-H］-。以上核磁数据与文献［9］中报道的对香豆酸(p-coumaric acid)的核磁数据基本一致，因此确定该化合物为对香豆酸(p-coumaric acid)。

化合物11 白色针状晶体(C7H6O3);1H NMR(Acetone-d5，600 MHz)δ:7.89 (2H，d，J=8.7 Hz，H-2，6)，6.90 (2H，d，J=8.7 Hz，H-3，5);ESI-MS m/z 137［M-H］-。以上核磁数据与文献［11］中报道的对羟基苯甲酸(p-hydroxybenzoic acid)的核磁数据基本一致，因此确定该化合物为对羟基苯甲酸(p-hydroxybenzoic acid)。

化合物12 黄色粉末(C25H24O12);1H NMR(DMSO-d6，600 MHz，)δ:7.95 (2H，d，J=8.5 Hz，H-2″，6″)，6.84 (2H，d，J=8.2 Hz，H-3″，5″)，6.42(1H，s，H-8)，6.19 (1H，s，H-6)，6.58 (1H，m，Hβ)，5.54 (1H，d，J=16.0 Hz，H-α)，5.39 (1H，d，J=7.6 Hz，H-1″)，4.16 (1H，d，J=11.8 Hz，H-6″)，3.99 (1H，dd，J=11.8，6.5 Hz，H-6″)，3.3～3.12 (3H，m);13C NMR (DMSO-d6，150 MHz)δ:156.7 (C-2)，133.1 (C-3)，177.5 (C-4)，161.4 (C-5)，99.1 (C-6)，164.7 (C-7)，94.0 (C-8)，156.7(C-9)，104.0 (C-10)，121.0(C-1')，131.0 (C-2')，115.3 (C-3')，160.2 (C-4')，115.3 (C-5')，131.0(C-6')，100.9 (C-1″)，74.3 (C-2″)，76.4 (C-3″)，70.3 (C-4″)，74.3 (C-5″)，62.8 (C-6″)，165.3 (CC=O)，122.0 (C-α)，145.1 (C-β)，17.7 (CH3);ESI-MS m/z 539［M +Na］+，515 ［M-H］-，285 ［M-230］-。以上核磁数据与文献［12］中报道的山奈素-3-O-(6″-O-巴豆酰)-β-D-葡萄糖苷(kaempferol-3-O-(6″-O-crotonoyl-β-D-glucopyranoside)的核磁数据基本一致，因此确定该化合物为山奈素-3-O-(6″-O-巴豆酰)-β-D-葡萄糖苷(kaempferol-3-O-(6″-O -crotonoyl)-β-D-glucopy ranoside)。

化合物13 黄色粉末(C13H8O6);1H NMR(DMSO-d6，600 MHz)δ:7.34 (1H，s，H-2)，6.80(1H，s，H-4)，6.30 (1H，s，H-5)，6.13 (1H，s，H-8);ESI-MS m/z 259 ［M-H］-。以上核磁数据与文献［13］中报道的1，3，6，7-四羟基-9-氧杂蒽酮(1，3，6，7-tetrahydroxyxanthone)的核磁数据基本一致，因此确定该化合物为1，3，6，7-四羟基-9-氧杂蒽酮(1，3，6，7-tetrahydroxyxanthone)。

化合物14 白色粉末(C7H6O5);254 nm 下紫无吸收;1H NMR (CD3OD，600 MHz)δ:7.06 (2H，s，H-2，6);以上核磁数据与文献［14］中报道的没食子酸的核磁数据基本一致，并与没食子酸标准品共薄层色谱，Rf值相同，因此确定该化合物为没食子酸。

化合物15 白色晶体(C29H50O);与β-谷甾醇标准品共薄层色谱，在多种溶剂系统中展开，Rf值相同，故鉴定化合物15 为β-谷甾醇(β-sitosterol)。

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