马翠云 刘高丽 吴松 王琼波 石晓

漯河医学高等专科学校，河南 漯河 462002

·实验教学 Experimental Teaching·

关于氨基酸分离教学实验的改进

马翠云 刘高丽 吴松 王琼波 石晓

漯河医学高等专科学校，河南 漯河 462002

本文利用薄层层析法分离氨基酸，该实验在展开过程中薄层板可立于展缸中，不用针线将层析做成圆筒，也不需悬挂系统。染色时层析板可以直接浸没于茚三酮溶液中，无需染色喷雾器和吹风机加热，操作简单，反应时间短，斑点清晰利于观察，十分适合教学实验。

薄层层析法；反应时间；教学实验

氨基酸的分离是生物化学的基础实验，也是医学、生物学、生物化学和食品等专业的学生所必须掌握的基本操作，该实验的原理为茚三酮与氨基酸反应生成蓝紫色物质（脯氨酸等仲胺氨基为黄色）化合物[1]主要过程分为展板、染色两个部分：传统实验展板时需要悬挂系统或用针线制成小圆筒；在染色喷雾过程中，因学生初学，喷洒技术欠佳，色斑易被冲散，若喷雾不均匀，导致比移值（Rf值）出现偏差，直接影响层析结果；纸层析所用的滤纸由于纤维的扩展性强，能吸收22%左右的水，而且其中6%～7%的水是以氢键形式与纤维素的羟基结合，不易晾干，甚至于点样时也不时需借助吹风机加热，导致实验的时间拉长且需要吹风机个数多，不利于学生教学，针对以上问题，本实验进行以下改进。

1 实验的准备

1.1 材料的准备

薄层板（载玻片，GF254硅胶），点样毛细管，镊子，尺子和铅笔，展缸，加热套。

1.2 试剂

0.5%的缬氨酸，赖氨酸溶液；显色剂（0.1%的茚三酮的乙醇溶液盛放于带磨口盖子的广口瓶中）。

2 方法的改进

2.1 展层的改进—薄层层析的制备

薄层层析板可以直接购买（底板为载玻片），可以在实验室进行制作：0.1% CMC（羧甲基纤维素钠）水溶液回流5个小时至无色透明粘稠状液体，冷却至室温，取100 ml上清液加适量GF254硅胶并一个方向搅拌均匀（用药匙沥下呈流线型）；均匀薄厚一致的铺在载玻片上，然后舀一勺倒在载玻片中间使其慢慢布满整块板面，最后轻轻振动几下，记住一定不要有气泡，在透射光及反射光下检视表面平整，麻点及破损；于室温下晾干置于干燥器中备用。

2.2 点样的改进

在薄层板两端各1 cm处画一直线，在一端直线处平均分成3个点分别记为1，2，3；用毛细管吸取懒氨酸在1，3上，吸取缬氨酸在2，3点上。蘸取氨基酸时，如有毛细管处有气泡滴夜等，可在薄层板上端1 cm处进行处理。

2.3 展开过程的改进

在展瓶（可用磨口广口瓶代替）中倒入少量的展层剂（液面小于1cm），用镊子将点好样的薄层板小心放入展瓶中，不要使薄层板贴壁，点样的一端在下，扩展剂的液面需低于点样线，盖上盖子，待溶剂上升至上端直线处时，用镊子将薄层板取出。

为防止氨基酸样品拖尾现象，可在展开剂中加一滴三乙胺，形成竞争吸附，更便于实验观察分析。

2.4 显色的改进

将展毕的薄层层析晾干后，用镊子夹起上端慢慢使整块薄层层析板浸没到显色剂中，取出后，把载玻片后面擦干净，放入已稳定的60 v的加热套中，氨基酸慢慢显色（从薄层板的背面更容易观察出氨基酸点的形状和颜色）。

2.5 Rf值的计算

用铅笔圈出氨基酸斑点的大小，量出每个样品从原点到层析斑点中心的距离x，原点到溶剂前沿的距离y，计算出各样品的Rf＝x/y值.

3 总结

薄层层析法分离氨基酸的试验不需配置氨基酸混合液，避免传统实验用滤纸做载体，不需要用针线将滤纸做成圆筒形，也不需要先放一个装有展层剂的小烧杯预平衡整个大层析缸[2-3]。整个实验操作过程中，改进的层析法耗材少；染色时可以直接浸没于茚三酮溶液中，无需染色喷雾器染色和吹风机使其显色[4]，也不需要把茚三酮加入展开剂中，只在展板结束后，用茚三酮显色，准确记录氨基酸的Rf值。操作简单，反应时间短，斑点清晰利于观察等优点，更便于学生容易掌握和运用。

[1]刑其毅, 裴伟伟，徐瑞秋, 等. 基础有机化学[M]. 3版. 北京：高等教育出版社，2005：983.

[2]周丽华, 冯道全, 倪惠琼, 等. 氨基酸纸上层析方法的研究[J]. 安徽理工大学学报(自然科学版)，2003(1): 47-49.

[3]杨晓玲, 赵宗云, 刘永军, 等. 应用纸层析分离鉴定氨基酸的方法改进[J]. 植物生理学通讯, 2002, 38(4): 368.

[4]杨丽, 尤丽, 叶金秀, 等. 纸层析分离鉴定氨基酸实验的改进[J]. 云南民族大学学报(自然科学版), 2011, 20(3): 229.

The Improvement of the Amino Acids' Separation on Experiment Teaching

MA Cuiyun LIU Gaoli WU Song WANG Qiongbo SHI Xiao,Luohe Medical College, Luohe He’nan 462002, China

In this article, Thin Layer Chromatography (TLC) was used to isolate the amino acid, during the process of deploy method, thin layer plate can stand in the ex-hibition bottle without cylinder which made by Layer Chromatography during a needle and thread and the suspension system. At the step of dyeing, the plate can be immersed in ninhydrin solution directly without dyeing spray and hair dryer heating, it is fully applicable to teaching experiment for its simple operation, short reaction time, and spots clear observation.

Thin layer chromatography, Reaction time, Teaching experiment

G642

B

1674-9308（2014）08-0018-02

10.3969/J.ISSN. 1674-9308.2014.08.010