徐志南

（江苏省滨海县五汛镇中心卫生院，江苏 滨海 224532）

亳菊总黄酮类的抗氧化活性研究

徐志南

（江苏省滨海县五汛镇中心卫生院，江苏 滨海 224532）

目的研究亳菊总黄酮类的抗氧化活性。方法采用乙醇提取法，提取毫菊中的总黄酮类，以羟基自由基、FeSO4、亚硝酸盐为材料，采用Fenton法测定亳菊总黄酮类对OH-、Fe2+、亚硝酸盐清除率的影响；以卵黄脂蛋白脂质为材料，采用Decker法测定亳菊总黄酮类对卵黄脂蛋白脂质的抑制作用的影响。结果亳菊总黄酮类对OH-、Fe2+、亚硝酸盐的清除作用随亳菊总黄酮类浓度的升高而增强，对卵黄脂蛋白脂质过氧化也有显著的抑制作用并随亳菊总黄酮类浓度升高而增强。结论亳菊总黄酮类化合物具有很好的抗氧化能力。

亳菊；总黄酮类；抗氧化活性；清除率

菊花为我国传统用药，其“苦、辛，微寒”，具有“清热解毒、平肝”之功效[1]。菊花中主要含萜类和挥发油、黄酮类化合物等生物活性物质。现代研究表明，菊花黄酮具有广谱抗菌、抗病毒、降压、增加冠脉血流量、清除活性氧自由基等生理活性。亳菊(C. morifolium Ramat‘Boju’)主产于安徽亳州市辛集、大寺、十九里镇等地，为药用菊花的主要来源之一，充分开发利用亳菊中的黄酮类成分具有十分重要的现实经济意义。本研究通过乙醇提取法，提取毫菊中的总黄酮类，采用Fenton和Decker法测定亳菊总黄酮类对羟基自由基、FeSO4、亚硝酸盐的清除作用和对卵黄脂蛋白脂质的抑制作用的影响，旨在为深入开展亳菊总黄酮类研究、拓宽亳菊综合利用途径奠定理论基础和实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料：①材料：亳菊是购买于太和县医药公司。②主要仪器：HH-1数显恒温水浴锅；紫外灯；FA/JA电子天平；UV-757CRT型紫外可见分光光度计；微量定量移液器。③主要试剂：芦丁；石油醚；乙醇；三氯化铝；氢氧化钠；硝酸铝；亚硝酸钠均为分析纯。

1.2 方法：①Fe2+清除率测定：在各试管中加入不同质量浓度的亳菊总黄酮类溶液，空白对照用体积分数95%的乙醇，阳性对照用等质量浓度的EDTA代替样品。再分别加入2 mmol/L的FeSO4 0.1 mL和5 mmol/L的Ferrozine 0.2 mL，最后各管用蒸馏水补至5 mL，室温放置20 min，于562 nm处测定吸光度，根据吸光度的减少程度计算亳菊总黄酮类对Fe2+的螯合率。②对卵黄脂蛋白脂质过氧化的抑制作用：用0.1 mol/L pH值7.4的PBS缓冲液配制体积分数为3.85%的卵黄悬液，分别吸取该悬液0.2 mL加入不同质量浓度的样品，空白对照为体积分数70%的乙醇。各管再加入0.1 mL 25 mmol/L FeSO4，用pH值7.4的PBS补充至2 mL，37 ℃恒温震荡15 min。取出后分别加入0.5 mL 20%的三氯乙酸，3500 r/min离心10 min。分别吸取上清液2 mL于试管中，加入0.28%的硫代巴比妥酸1 mL，加塞，放入沸水浴中15 min。冷却后于波长532 nm处测定吸光度，根据吸光度计算抑制率。同时以等质量浓度的BHT作为阳性对照。

2 结果与分析

2.1 芦丁标准曲线的建立：得到回归方程为：Y=12.093X-0.0009，R2为0.9990。芦丁浓度在0.008～0.048 mg/mL浓度范围内与吸光度A之间有较好的线性关系。

2.2 亳菊黄酮类化合物对OH-的清除率的影响：羟基自由基属于活性氧物种，是正常有氧代谢的副产物。在生理条件下，能导致生物体内DNA，蛋白质和脂质氧化损伤。此外羟基自由基不仅破坏细胞膜的通透性，引起细胞内外离子浓度失衡，而且可抑制细胞间隙通讯，使细胞信息传递通路发生障碍。据报道，中药来源的黄酮可以有效地清除体内过剩的活性氧自由基，保护细胞和线粒体的正常结构和功能，防止对身体的伤害。亳菊黄酮类化合物对羟基自由基具有较高的清除率，随着黄酮浓度的增加，其清除羟基自由基的能力进一步增强。在同等条件下，亳菊黄酮类化合物对羟基自由基的清除率优于抗坏血酸。

2.3 毫菊黄酮类化合物对NO2-的清除率的影响：亚硝胺是一类重要的强致癌物质，而亚硝酸盐是亚硝胺合成的前体物质。因此，阻断亚硝胺的合成或清除亚硝酸盐是防止癌症的有效途径之一。大量实验证实，毫菊黄酮类化合物对亚硝酸盐具有较高的清除率，随着毫菊黄酮类化合物质量浓度的增大，对亚硝酸盐的清除作用增强，呈现较好的量效关系。在同等条件下，毫菊黄酮类化合物对亚硝酸盐的清除率优于抗坏血酸。

2.4 亳菊黄酮类化合物对卵黄脂蛋白脂质过氧化抑制的影响：卵黄中以卵黄脂蛋白溶液为脂质过氧化体系，测定了亳菊黄酮类黄酮类化合物所脂质过氧化的抑制作用。亳菊黄酮类化合物对Fe2+诱导的卵黄脂蛋白脂质过氧化有较强的抑制作用，并且随着其质量浓度的增加，抑制率逐渐增大。在同等质量浓度水平下亳菊黄酮类化合物对卵黄脂蛋白过氧化的抑制作用强于BHT。

3 讨 论

大量研究证实，黄酮类化合物可通过酚羟基与自由基反应生成较稳定的半醌式自由基，从而终止自由基链式反应，能有效地阻止脂质过氧化引起的细胞破坏[2]，起到天然抗氧化剂的功效。本实验采用乙醇浸提方法提取中毫菊中的黄酮类化合物，并考察亳菊总黄酮类的体外抗氧化的作用。通过四种方法来测定亳菊总黄酮类化合物的抗氧化能力，观察亳菊对OH-、Fe2+、亚硝酸盐的清除率和对卵黄脂蛋白脂质过氧化的抑制作用。结果表明，亳菊总黄酮类对OH-、Fe2+、亚硝酸盐的清除作用随亳菊总黄酮类浓度的升高而增强，对卵黄脂蛋白脂质过氧化也有显著的抑制作用并随亳菊总黄酮类浓度升高而增强，亳菊总黄酮类化合物有很好的抗氧化能力。

[1] 杨建雄.连翘叶黄酮的体外抗氧化作用[J].天然产物研究与开发, 2007,19(1):97-99.

[2] 朱慧,马瑞君,吴双桃,等.薇甘菊总黄酮的提取及清除羟自由基活性的测定[J].食品科学,2010,31(6):70-73.

R282.710.3

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1671-8194（2014）29-0060-02