刘 淼，张 月，何敏红，周 玲，郑 航

(南方医科大学附属南方医院，广州510515)

研究发现，高脂饮食女性发生乳腺癌的风险增加，食物中多不饱和脂肪酸如花生四烯酸(AA)摄入过多可增加乳腺癌发生的风险［1～4］。AA主要经过环氧化酶(COX)与脂氧合酶(LOX)途径进行代谢;乳腺癌患者LOX代谢产物的表达增加［5，6］。雷帕霉素靶蛋白(mTOR)是调节细胞生长与代谢的中心信号分子，其过度激活可导致细胞增殖异常。乳腺癌患者存在mTOR信号通路的过度活化［7，8］。2012年12月～2013年6月，我们将LOX代谢产物5-羟二十烷四烯酸(HETE)、12-HETE及mTORC1抑制剂雷帕霉素(Rap)作用于体外培养的乳腺癌MCF-7细胞，探讨mTORC1在5、12-HETE促进乳腺癌发生发展过程中的作用。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 乳腺癌MCF-7细胞株由本实验室保存。DMEM培养基、胰酶及胎牛血清均购自GIBCO公司，5-HETE及12-HETE购自Cayman Chemical公司，Rap购自美国惠氏公司，β-actin、S6、山羊抗兔、兔抗山羊二抗购自Santa Cruz公司，P-S6(Ser235/236)抗体购自Cell Signaling Inc公司。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养及干预 乳腺癌MCF-7细胞培养于含10%胎牛血清、1×105U/L青霉素及链霉素的DMEM培养液中，置于37℃、5%CO2孵箱内培养，根据细胞生长速度适时更换培养液，用0.25%胰蛋白酶、0.02%EDTA消化分散细胞，进行传代或接种于6、24、96孔板培养。取生长状态良好的细胞分为四组，对照组加入0.1%DMSO，HETE组加入5-HETE 及12-HETE 15 μmol/L，Rap 组加入 Rap 100 μmol/L，HETE+Rap 组加入 Rap 100 μmol/L 及 5-HETE+12-HETE 15 μmol/L。每一浓度设6个复孔，并设阴性对照，以空白孔调零。

1.2.2 检测指标

1.2.2.1 细胞增殖率 采用CCK-8法检测各组细胞增殖率。各组细胞培养72 h后，每孔加入CCK-8溶液10 μL，放在培养箱内继续作用4 h。采用酶标仪测定各组450 nm处测定光密度值，取6孔平均值表示MCF-7细胞增殖率。

1.2.2.2 mTORC1 通路蛋白表达 采用免疫印迹法检测mTORC1通路下游蛋白P-S6(S235/236)的表达水平。……