步玉辉，史建红，崔乃鹏，何 欢，王 冰，陈保平

(1河北大学附属医院，河北保定071000;2河北大学)

目前乳腺癌的预防、诊断和治疗已经取得长足进步，但部分患者确诊时已出现局部浸润和转移，5年生存率很低［1］。研究发现，血小板源性生长因子(PDGF)在肿瘤血管形成、肿瘤的生长和转移中起重要作用，可能参与了乳腺癌的增殖和转移过程［2］。2013年 9月 ～2014年 1月，我们观察了PDGF-BB对乳腺癌SK-BR-3细胞迁移、增殖的影响，旨在进一步探讨乳腺癌增殖、转移的分子生物学机制及其干预方法。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞株及培养条件 人源性SK-BR-3乳腺癌细胞购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心。用含10%胎牛血清及100 U/mL青霉素、链霉素的 RPMI 1640培养基，于37℃、5%CO2、相对湿度90%的培养箱中培养，定期换液传代，取对数生长期细胞进行实验。

1.1.2 主要试剂 RPMI1640培养基购自Gibico公司，胎牛血清购自Biological公司，胰蛋白酶消化液购自Sigma公司，PDGF-BB购自Pepro Tech公司;MTS CellTiter 96 A Queous One Solution Cell Proliferation Assay Kit购自Promega公司

1.1.3 仪器与设备 CO2培养箱(美国Thermo公司)，超净台(青岛海尔股份有限公司)，全自动多功能酶标仪(美国Thermo公司)，倒置显微镜(Olympus公司 CKX41);高速冷冻离心机(德国 Sigma公司)，Countstar细胞计数仪(上海睿钰生物科技有限公司)。

1.2 实验方法

1.2.1 PDGF-BB对SK-BR-3细胞迁移能力影响的观察 采用划痕试验。收集对数生长期SK-BR-3细胞，调整细胞浓度为5×105/mL，铺于6孔板中的血盖片上，每孔样品体积为100 μL，另加入10%胎牛血清 RPMI 1640培养基2 mL。设定1个孔为对照组不加药，4孔加PDGF-BB使其终浓度分别为0.5、1、2、4 ng/mL，弃 1 个孔。于 37 ℃、5%CO2、相对湿度90%的培养箱中培养24 h，改用含2%胎牛血清的RPMI 1640培养基培养24 h，用移液管尖端在每孔血盖片相同位置作线性划痕，PBS洗去漂浮细胞，保持PDGF-BB浓度不变，继续培养12、24、48 h，倒置显微镜下测量其迁移距离。……