张 睿 张 军 赵承斌

哈尔滨医科大学附属第四医院骨科，黑龙江哈尔滨 150086

周围神经损伤是骨科常见的疾病之一，虽然周围神经具有一定的再生能力，但对于较大缺损却很难自身修复[1]。随着组织工程学领域研究的深入，神经干细胞 （NSCs） 已被公认为是对神经损伤修复的有效方法，通过NSCs 在神经断端的不断分化，使受损的周围神经重新恢复连接。然而单纯形态学得连接不能保证神经的传导功能，有研究表明，这与NSCs 分化过程中分化为胶质细胞和神经元的比例有关[2]，提高神经元的分化比例，降低胶质细胞的表达可有效提高神经的传导速度，因此许多学者通过不同方法促进神经干细胞向神经元的分化[3-5]，均取得了一定进展。 本研究通过激活态雪旺细胞（SCs）刺激NSCs 的分化，观察其诱导NSCs 分化为神经元的能力。

1 材料与方法

1.1 实验材料

雌性SD 大鼠[中国农科院哈尔滨兽医研究所提供，许可证号：SYXK（黑）2006-032]；DMEM/F12 细胞培养基（Hyclone 公司，美国）；青-链双抗，胰蛋白酶，Ⅱ型胶原酶 （碧云天， 中国）； 兔抗鼠单克隆抗体Nestin，FITC 标记的羊抗兔IgG，兔抗鼠碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、表皮细胞生长因子（EGF）单克隆抗体，兔抗鼠MAP-2、GFAP 单克隆抗体（武汉博士德公司）；Transwell 培养皿（Corning 公司，美国）。

1.2 实验方法

1.2.1 神经干细胞的分离培养与鉴定 取出生24 h 内的SD 大鼠，断髓处死后无菌条件下取出脊髓，显微镜下剥离硬脊膜，剪成5 mm3组织块，加入0.25%胰酶消化10 min，用吸管反复吹打至单细胞悬液，加入5 mL DMEM/F12 培养基终止消化。 1000 r/min 离心5 min，弃上清，加入含20 ng/mL 的EGF 和20 ng/mL的DMEM/F12 培养液，重悬后移入细胞培养瓶，置于37℃含5%CO2的细胞培养箱中培养。……