汤兴丽，王 萍

(皖南医学院 微生物学与免疫学教研室，安徽 芜湖 241002)

研究表明，人类精子膜抗原能影响精子的受精功能和胚胎的发育，与生育密切相关［1］，精子膜抗原的研究有利于生殖免疫，生殖生理，以及免疫不孕和免疫避孕的研究。精子膜抗原的提取是上述研究的基础。提取精子膜抗原的方法有很多种，本实验室主要选用尿素裂解液和TDOC裂解液提取了精子膜抗原，同时进行SDS-PAGE分析比较，为进一步应用精子膜抗原检测精子抗体的研究提供物质基础。

1 材料和方法

1.1 实验材料

1.1.1 精液 来源于皖南医学院生育与不孕不育研究所，参照WHO正常标准［2］，选用新鲜液化的精液样本，精子密度≥20×109/L，活率≥70%，活力良好，精液量≥2 ml，pH 7.2 ～7.8，精浆及血清抗精子抗体(AsAb)阴性。

1.1.2 主要试剂 二硫苏糖醇(DTT)为Merck公司产品，Triton X-100为SIGMA公司产品，脱氧胆酸钠(DOC)为上海蓝季科技公司产品，苯甲磺酰氟(PMSF)、丙烯酰胺、四甲基乙烯二胺(TEMED)、2×SDS还原性样品缓冲液、BCA蛋白浓度测定试剂盒均为BOSTER公司产品，过硫酸铵(APS)为国药集团化剂公司产品，考马斯亮蓝R-250购自合肥安启公司，蛋白质marker为Fermentas产品。

1.1.3 EPS300垂直电泳槽(上海天能科技有限公司)，TGL 16M高速冷冻离心机(长沙湘智离心机仪器有限公司)，uV-7502 PC紫外可见分光光度计(上海欣茂仪器有限公司)。

1.2 实验方法

1.2.1 尿素裂解液提取法［3］将4份新鲜液化的精液混合，加等量生理盐水，1 500 r/min离心10 min，重复3次，上清收集为精浆，留取沉淀加2 ml尿素裂解液(7 mol/L尿素，2 mol/L硫脲，100 mmol/L DTT)，然后加 100 mmol/L PMSF 40 μl，于4℃冰箱放置1 h后12 000 r/min 4℃离心10 min，收集上清分装，－20℃保存备用。

1.2.2 TDOC裂解液提取法 将4份新……