樊新荣，何清湖，颜 苗

（1.湖南中医药大学，湖南 长沙41007；2.中南大学湘雅二医院，湖南 长沙410011）

克癃胶囊是结合多年治疗前列腺增生症(Benign Prostatic Hyperplasia，BPH)的临床经验与现代药理学研究成果拟定化裁的组方，主要治疗中医辨证为肾虚血瘀证的患者，课题组前期临床研究发现克癃胶囊对中医证候总体疗效和中医证候积分的改善有显著的治疗优势，并验证了克癃胶囊治疗BPH的有效性和安全性[1]。BPH 是增生的前列腺压迫前列腺尿道或影响膀胱尿道口梗阻，出现尿频、排尿困难，甚则尿液无法排出的病症，是中老年男性的常见病和多发病。何清湖[2-3]通过审症求因、临床验证、微观辨证佐证三个层面探讨BPH 病因病机，认为肾虚是BPH 发生的基本条件，血瘀是BPH 病理改变的关键环节，肾虚和血瘀相互影响，构成了BPH 的病理机制。本研究是以临床广泛应用的保列治和中药前列癃闭通为对照，观察治疗前后克癃胶囊对BPH肾虚血瘀证大鼠前列腺、性激素水平的影响，探讨克癃胶囊抑制前列腺增生的机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 健康成年雄性SD 大鼠72 只，体质量230～280 g，由湖南中医药大学动物实验中心提供，动物合格证号：SCXK（湘）2009-0004。饲养环境:室温为（23±2）℃，相对湿度为（60±10）%。

1.1.2 仪器 AG204-N 型电子分析天平（瑞士梅特勒-托力多有限公司）；AF100 型制冰机（意大利斯科茨曼公司）；Dyy-Ⅲ-6B 型稳压稳流电泳仪（北京市六一仪器厂）；显微手术器械（上海手术器械公司）；解剖显微镜（日本OLYMPUS 公司）；3K18 型低温离心机（德国SIGMA 公司）；7001×UVI 型数字彩色显微图像分析系统 （英国UVI 公司）；GC-1500r 型放射免疫计数器 （科大创新股份有限公司中佳分公司）；Biofuge fresco 4 ℃离心机（美国SORVALL 公司）；RM2125 石蜡切片机 （德国Leica 公司）；MK3酶标仪（芬兰雷勃公司）。

1.1.3 试剂和药物 碘[125I]双氢睾酮放射免疫分析药盒、碘[125I]雌二醇放射免疫分析药盒、FSH-放免分析药盒、LH-放免分析药盒均购自北京科美东雅生物技术有限公司。Trizol 试剂盒购自SIGMA 公司。克癃胶囊为中试产品，批号：1000814，规格：0.35 g/粒，由杨凌和田生物科技有限公司生产。前列癃闭通片：0.5 g/片，批号：090301，由湖南药圣堂制药有限公司生产。非那雄胺（保列治），规格5 mg/片，批号：285922，由Merck&Co,Inc.（U.S.A）生产。

1.2 动物分组及给药方法

课题组采用去势手术、激素注射和冰浴方法已成功建立BPH 肾虚血瘀证大鼠模型，并通过考察前列腺湿重、前列腺指数和血清前列腺特异性酸性磷酸酶（PAP）含量以及观察模型大鼠病理组织形态学，对此模型的成功复制进行了评价（另文发表）。前期研究确定克癃胶囊正常成人量为3.15 g/d，按《动物与人体的每公斤体质量剂量折算系数表》查出成人与大鼠每千克体质量剂量折算系数（W）为6.25，按人与大鼠之间用药剂量换算公式：大鼠的剂量（mg/kg）=W×人的剂量（mg/kg）设计克癃胶囊大鼠的低、中、高给药剂量分别为0.175、0.350、0.700 g/（kg·d）。实验动物适应性喂养1 周后，随机分为6 组，每组12 只。空白对照组（简称空白组）普通饲养，自29 d 起，给予0.1 mL/（kg·d）生理盐水灌胃；模型组大鼠在造模成功后第2日给予0.1 mL/（kg·d）生理盐水灌胃；其他各组在造模成功后第2日按下述方法给药：保列治组按照0.520 mg/（kg·d）保列治片溶液灌胃；前癃通组按照0.625 g/（kg·d）前列癃闭通片溶液灌胃；克癃胶囊低剂量组（简称克癃低组）、克癃胶囊中剂量组（简称克癃中组）、克癃胶囊高剂量组（简称克癃高组）分别按照0.175、0.350、0.700 g/（kg·d）配制克癃胶囊溶液灌胃。以上各组后续给药均为每日1 次，连续4 周。

1.3 评价指标及检测方法

1.3.1 前列腺湿质量检测及指数的计算 取出前列腺，仔细分离各叶前列腺，用电子天平称大鼠前列腺湿质量，并根据电子分析天平测量的大鼠体质量计算前列腺指数。

前列腺指数=前列腺湿质量(mg)/体质量(g)×100%

1.3.2 前列腺组织细胞形态学观察 （1）脱水及包埋：将固定好的前列腺组织经常规梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。（2） 切片：连续切片，片厚5 μm，每隔20 张取蜡带贴于涂有蛋白甘油的载玻片上。（3）HE 染色：常规苏木精-伊红染色，脱水、透明、封片。（4）观察：光学显微镜下观察前列腺的细胞形态学改变。

1.3.3 血清性激素水平的检测 腹主动脉取血，加入肝素钠抗凝，15 min 后用低温离心机离心10 min(3 000 r/min)，分离血清置于-20 ℃冰箱内保存，送湖南中医药大学第一附属医院同位素科用放射免疫法测定各组大鼠血清睾酮(T)、雌二醇(E2)、卵泡刺激素（FSH）和黄体生成素（LH）含量。先将校准品或样品、标记物和抗体按程序规定依次加入试管中，使标记和非标记抗原与有限量抗体互相竞争结合，待反应平衡后，加入分离剂，离心沉淀，使游离抗原与抗原抗体复合物分离，测量沉淀物的放射性强度。分别随T、E2、FSH、LH 含量的增加，其放射性强度则相应降低。

2 结果

2.1 各组大鼠体质量、前列腺湿质量和前列腺指数的比较

各组大鼠治疗后体质量比较显示：空白组、模型组两组大鼠体重无显著性差异(P＞0.05)；与模型组比较，克癃中、高剂量组大鼠体质量无差异(P＞0.05)，保列治组、克癃低剂量组大鼠体质量降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。

各组大鼠治疗后前列腺湿质量比较显示：与空白组比较，模型组前列腺湿质量增加，差异具有统计学意义(P＜0.01)；与模型组比较，保列治组、克癃低、中、高剂量组的前列腺湿重均减小(P＜0.05)；与保列治组比较，克癃中、高剂量组的前列腺湿重无显著性差异(P＞0.05)，克癃低组前列腺湿质量增高，差异具有统计学意义(P＜0.05)。

各组大鼠治疗后前列腺指数比较显示：与空白组比较，模型组前列腺指数升高，差异有统计学意义(P＜0.05)；与模型组比较，保列治组、克癃低、中、高组前列腺指数均减小(P＜0.05)；与保列治组比较，克癃中、高剂量组前列腺指数减小(P＜0.05)；与克癃中、高剂量组比较，克癃低组前列腺指数均增高，差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 各组大鼠体质量、前列腺湿质量和前列腺指数比较 （±s）

表1 各组大鼠体质量、前列腺湿质量和前列腺指数比较 （±s）

注：与空白组比较＃P＜0.05，＃＃P＜0.01；与模型组比较●P＜0.05；与保列治组比较▲P＜0.05；与前癃通组比较★P＜0.05；与克癃中组比较■P＜0.05；与克癃高组比较▼P＜0.05。

组 别空白组模型组保列治组前癃通组克癃低组克癃中组克癃高组n 药物剂量（kg·d）10 9 10— —9998 0.520 mg 0.625 g 0.175 g 0.350 g 0.700 g大鼠体质量（g）484.85±20.57 471.43±22.32 399.56±17.53●411.36±21.29●440.00±17.62●■▼472.22±19.77 476.14±19.82前列腺质量湿质量（mg）0.16±0.02 0.33±0.07＃＃0.16±0.06●0.17±0.02●0.22±0.04●▲★0.17±0.02●0.16±0.03●前列腺指数（%）0.033±0.002 0.070±0.005＃0.040±0.006●0.041±0.003●0.050±0.005●■▼0.036±0.004●▲★0.034±0.002●▲★

2.2 各组大鼠前列腺组织病理学变化的比较

HE 染色结果显示（图1），空白组前列腺上皮细胞排列清楚，腺上皮单层柱状，可见少许扁平状基底细胞及明显基底膜，腔大，腔内充满分泌物，间质、纤维组织含量无增加。模型组可见腺上皮皱缩，部分区域层次增加，排列紊乱，多数腺上皮呈乳头状突向腔内成锯齿状，腺体僵硬感，腔内分泌物少，间质增宽，结缔组织增生，间质纤维组织及平滑肌组织增多。保列治组，可见腺上皮出现增生并出现分泌现象，多为单层柱状，前列腺腺体大小接近，排列整齐，间质结缔组织增生，但较模型组大大减轻。前癃通组，可见腺上皮增生不明显，腺腔分泌物少，间质细胞增生，但结缔组织增生不明显。克癃低组，可见腺上皮增生，腺腔分泌物少，间质细胞轻微增生，结缔组织增生不明显。克癃中组可见腺上皮有增生迹象，腺腔内见分泌物，间质细胞增生，结缔组织无增生。克癃高组可见腺上皮增生迹象，腺腔内见分泌物，间质细胞增生，结缔组织无增生。

图1 大鼠前列腺组织HE 染色（×250 倍）

2.3 各组大鼠血清性激素水平的比较

2.3.1 各组大鼠血清T 和E2含量的比较 与空白组比较，模型组血清T 含量有显著性升高(P＜0.01)、血清E2含量显著降低(P＜0.01)；与模型组比较，保列治组、克癃低组血清T 含量和E2含量无显著性差异(P＞0.05)，前癃通组、克癃中、高剂量组血清T 含量降低(P＜0.05)、血清E2含量显著升高(P＜0.01)；与前癃通组比较，克癃中、高剂量组血清T 和E2含量无显著性差异(P＞0.05)。见表2。

表2 各组大鼠血清T 及E2 含量的比较 （±s，μg/mL）

表2 各组大鼠血清T 及E2 含量的比较 （±s，μg/mL）

注：与空白组比较＃＃P＜0.01；与模型组比较●P＜0.05，●●P＜0.01。

组 别空白组模型组保列治组前癃通组克癃低组克癃中组克癃高组药物剂量（kg·d）n T E2— —0.520 mg 0.625 g 0.175 g 0.350 g 0.700 g 10 9 10 9998 0.19±0.026 0.28±0.028＃＃0.28±0.015 0.24±0.025●0.27±0.029 0.23±0.023●0.22±0.031●10.93±0.62 7.31±0.38＃＃7.37±0.22 9.05±0.53●●7.35±0.26 9.51±0.41●●9.87±0.44●●

2.3.2 各组大鼠血清促性腺激素FSH 和LH 含量的比较 与空白组比较，模型组血清FSH 和LH 的含量升高(P＜0.05)；与模型组比较，保列治组血清FSH 和LH 的含量无显著性差异(P＞0.05)，前癃通组、克癃低、中、高剂量组血清FSH 和LH 的含量降低(P＜0.05)；与前癃通组比较，克癃低、中、高剂量组血清FSH 和LH 的含量无显著性差异(P＞0.05)。见表3。

表3 大鼠血清卵泡雌激素FSH 和黄体生成素LH 含量 （±s，mIU/mL）

表3 大鼠血清卵泡雌激素FSH 和黄体生成素LH 含量 （±s，mIU/mL）

注：与空白组比较＃P＜0.05；与模型组比较●P＜0.05。

组 别空白组模型组保列治组前癃通组克癃低组克癃中组克癃高组LH 5.15±0.15 7.58±0.99＃※7.50±0.74 6.12±0.49●6.54±0.44●6.08±0.35●5.99±0.42●药物剂量（kg·d）n— —0.520 mg 0.625 g 0.175 g 0.350 g 0.700 g 10 9 10 9998 FSH 4.28±0.57 5.14±0.42＃※5.16±0.46 4.65±0.31●5.01±0.34●4.70±0.42●4.43±0.24●

3 讨论

3.1 克癃胶囊对BPH 肾虚血瘀证模型大鼠体质量、前列腺湿重、前列腺指数的影响

BPH 是由前列腺组织病理性增生而导致的疾病，选择测量前列腺组织湿重并计算前列腺指数，可以宏观地显示出前列腺组织增生的情况。本实验结果表明，克癃胶囊各剂量组均可明显降低BPH 大鼠的前列腺湿重和前列腺指数，抑制大鼠前列腺增生，有效缓解了前列腺增生的静力性因素。但是高、中、低剂量组之间在该作用的发挥方面有所差别，显示出剂量依赖性。克癃胶囊、保列治和前癃通片在对前列腺湿质量的影响方面没有差别，但在对前列腺指数的影响方面，克癃胶囊优于保列治和前癃通片。本实验中体质量参数主要用于计算前列腺指数，虽然前癃通组、保列治组和克癃低剂量组使动物体质量相比模型组显著降低（P＜0.05），但动物体质量受环境、饲养方法、给药过程等因素的影响，其降低还不能说明药物对动物体质量有直接的影响，而应依据“药物安全性评价”的标准进行进一步研究。

3.2 克癃胶囊对BPH 肾虚血瘀证模型大鼠前列腺组织病理学的影响

研究表明BPH 主要是间质细胞的增生。间质和腺性上皮部分的比例在正常前列腺是4∶1,但在BPH则达到6∶1[4]。本实验的BPH 大鼠前列腺组织病理切片观察结果显示：模型组腺上皮皱缩，部分区域层次增加，排列紊乱，多数腺上皮呈乳头状突向腔内呈锯齿状，腺体僵硬感，腔内分泌物少，间质增宽，有充血，结缔组织增生，间质纤维组织及平滑肌组织增多；保列治组可见腺上皮出现增生并出现分泌现象，多为单层柱状，前列腺腺体大小接近，排列整齐，间质结缔组织增生，但较模型组大大减轻，接近假手术组；前癃通组可见腺上皮增生不明显，腺腔分泌物少，间质细胞增生，但结缔组织增生不明显；克癃胶囊各剂量组腺上皮增生，腺腔内见分泌物，间质细胞轻微增生，结缔组织无增生。从中可以看出，模型组的前列腺增生主要以间质增生为主，这与大部分报道相类似。克癃胶囊可以明显抑制模型大鼠前列腺增生的进程，从病理学上的改善是疾病好转的重要指征，本实验通过克癃胶囊治疗后，BPH 大鼠前列腺的组织病理学明显改善，显示克癃胶囊能够明显抑制BPH 大鼠前列腺腺体和腺上皮的增生，更重要的是有效地抑制间质和结缔组织的增生。

3.3 克癃胶囊治疗BPH 的作用机制分析

众多学者认为，BPH 的发生是雄激素与雌激素相互协同作用的结果，这种协同作用主要体现在E2和T 的比例关系上，E2和T 二者比例关系失衡是BPH 发生的重要因素。而性激素的产生又受到垂体分泌的促性腺激素即FSH 和LH 的控制。

从本实验结果来看，模型组比空白组的血清T含量显著性升高(P＜0.01)、血清E2含量显著降低(P＜0.01)、血清FSH 和LH 的含量升高(P＜0.05)，提示血清T、FSH 和LH 含量的升高及E2含量的下降是BPH 的产生因素。与模型组比较，克癃胶囊中、高剂量组血清T 含量降低(P＜0.05)，E2含量显著升高(P＜0.01)，克癃低组血清T 含量和E2含量无显著性差异(P＞0.05)，显示克癃胶囊在调节BPH 的性激素T 和E2方面有剂量相关性；克癃低、中、高剂量组血清FSH 和LH 的含量降低(P＜0.05)，显示克癃胶囊在调节影响BPH 形成的性激素FSH 和LH 方面剂量相关性不明显。与模型组比较，前癃通组血清T、FSH和LH 含量降低(P＜0.05)、血清E2含量显著升高(P＜0.01)，显示前癃通也对BPH 性激素具有调节作用。与模型组比较，保列治组血清T、E2、FSH 和LH 含量无显著性差异(P＞0.05)，显示保列治对BPH 的性激素水平无显著影响，这一结果与保列治的作用机制和药理学实验研究结论相符[5-6]。

综上所述，在降低BPH 肾虚血瘀证模型大鼠的前列腺湿质量方面，克癃胶囊、前列癃闭通片和保列治具有相同的作用。但是保列治、前列癃闭通片对机体的体质量也有影响，而克癃胶囊中、高组则对体质量没有影响，并且克癃胶囊对BPH 模型大鼠血清性相关激素水平的紊乱具有调节作用，表明克癃胶囊是通过多环节、多靶点调节的途径达到治疗BPH的作用。

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