魏陵博，戎冬梅，李运伦，迟立萍，钟志欢，吉中强，焦华琛

成纤维细胞（CFs）增殖是多数心脏疾患病理改变的基础。成纤维细胞具有分泌功能，能够分泌释放内皮素（ET）、一氧化氮（NO）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）等，基质金属蛋白酶（MMP）可导致细胞外基质的过度降解，ET 可诱导心肌细胞肥大和刺激胶原合成，能加重心脏经皮冠状动脉介入治疗（PCI）后再狭窄的发生，一氧化氮（NO）是保护性因子，有阻止再狭窄发生的作用。本研究用解毒通络方含药血清干预新生大鼠主动脉成纤维细胞的培养，测定培养液血清中 MMP、ET、NO的含量，初步揭示该方对再狭窄的影响。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 1d～4d龄新生清洁级SD大鼠，雌雄不限，购自山东中医药大学实验动物中心。

1.1.2 实验药品 解毒通络方合剂组成：黄连12g，大黄3g，连翘15g，野葛根30g，水蛭6g，地龙12g。由山东中医药大学中药学院按制备合剂的常规方法制成灭菌合剂，1mL相当于生药材1g。

含药血清制备：取健康Wistar雄性大鼠12只，灌服解毒通络方合剂，每次按2mL／100g的体积给药（大约相当于60kg成人日剂量的15倍）。灌胃前12h禁食不禁水，每日1次，连续给药7d。于末次给药2h后，腹腔注射10%水合氯醛麻醉，无菌条件下腹主动脉取血，置无菌试管内。待凝固后37℃水浴1h，3 000r／min，离心15min，分离血清，-20℃冰箱保存备用。临用时，56℃恒温30min灭活，0.22μm微孔滤膜过滤除菌。含药血清呈淡黄清亮透明液体。

卡托普利：济南东风制药有限公司产品，用DMEM／F12培养基溶解、过滤除菌，4℃冰箱保存备用。

1.1.3 主要试剂 AngⅡ、胰蛋白酶，Sigma公司产品；DMEM培养基，赛默飞世尔生物化学制品有限公司产品；……