田秀丽，齐 峰(.承德医学院，河北承德 067000;2.保定市第一中医院)

结肠癌被发现时大多处于中晚期，死亡率仅次于肺癌和肝癌，居恶性肿瘤死亡榜的第三位，其中80%以上为散发性结肠癌(SCC)[1]。研究发现，结肠癌发生发展的途径主要有染色体不稳定(CIN)途径(以癌基因和抑癌基因为主)和微卫星不稳定(MSI)途径(以错配修复基因(MMR)为主)[2]。MMR是DNA修复系统的重要成员，已证实MMR的改变与多种恶性肿瘤尤其是结直肠癌的发病密切相关，并且与约15%的散发性结直肠癌有关[3-4]。本研究分别选取代表MSI途径的hMSH6基因和代表CIN途径的p53基因，采用免疫组化法检测二者在SCC中的表达情况，探讨hMSH6和P53蛋白在SCC发生发展中的作用。

1 材料与方法

1.1 临床资料 保定市第一中心医院病理科2010年-2012年经手术切除的结肠癌患者的存档蜡块60例，以距肿瘤边缘＞5.0cm的正常癌旁组织60例作为对照，所有病例均经病理明确诊断。所有结肠癌患者临床资料完整，术前未接受放疗和化疗，TNM分期为Ⅰ-Ⅳ期。除外家族性多发性腺癌(FAP)患者和HNPCC患者。

1.2 方法与试剂 石蜡包埋的组织4μm连续切片，采用免疫组化Envision二步法检测hMSH6和P53蛋白的表达，一抗(购自福州迈新生物技术开发有限公司，工作浓度1:100)4℃孵育过夜，DAB显色，苏木素复染。以PBS代替一抗作为阴性对照。以细胞核中出现棕黄色颗粒为阳性反应。

1.3 结果判定 每张切片计数5个高倍视野(10×40)，每个视野计数100个细胞。根据Fromowitz等[5]的方法判定结果:①不着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分;②着色细胞占计数细胞百分率≤5%为0分，6%-20%为1分，21%-50%为2分，≥51%为3分。……