余远迪，曾 泽，岳 华，张 斌

（西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都610041）

副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis，Hps）是普通猪上呼吸道的一种共栖菌，能在特定条件下侵入机体而引起严重的全身性疾病，以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为特征。主要临诊症状为发热、咳嗽、呼吸困难、消瘦、跛行、共济失调和被毛粗乱等，剖检病理变化表现为胸膜炎、肺炎、心包炎、腹膜炎、关节炎和脑膜炎等；主要危害2周龄～8周龄的仔猪，发病率一般为10%～15%，病死率可达50%以上［1－2］。猪胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，App）是猪传染性胸膜肺炎（Porcine infectious pleuropneumonia）的致病菌，以急性出血和慢性纤维素性坏死性胸膜炎病变为主要特征，慢性症状表现为可造成猪生长缓慢的肺损伤，给世界各地养猪业造成严重经济损失［3］。在临床诊断中，很难通过临床症状和病理特征鉴别这两种疾病的混合感染。而传统的鉴别诊断方法，即病原分离和血清学诊断，由于敏感性和特异性不高，不能满足快速鉴别诊断的需要，所以建立一种快速准确的病原检测方法尤为重要。多重PCR作为一种特殊的PCR比单项PCR更加快捷和简便，已应用于诊断多种疾病的混合感染［4－6］。本 试 验 根 据 Hps 16SrRNA 序 列 和 App ApxIVA基因序列各设计一对引物，通过特异性和敏感性试验，建立了可快速鉴别检测副猪嗜血杆菌和猪传染性胸膜放线杆菌的双重PCR方法。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株与毒株 Hps菌株参考血清1型（HS82）、2型（HS83）、3型（HS81）、4型（HS79）、5型（HS80）、6 型 （HS1072）、7 型 （HS1073）、8 型（HS1073）、9 型 （HS50）、10 型 （HS1076）、11 型（HS1077）、12 型 （HS1075）、13型 （HS1079）、14 型（HS1080）、15型（HS1081）、100株 Hps临床分离株（SWUN050～SWUN151），App参考菌株血清1型（CVCC259）、血 清 2 型 （CVCC260）、血 清 3 型（CVCC261）、血……